Disciplina Biologia Celular

22/03/2010
Disciplina Biologia Celular
Profª Cristina Lacerda Soares Petrarolha Silva
Curso de Biotecnologia
FISMA / FEA
Aula 2:
Tecnologia da Biologia Celular
Parte I
Bio Cel Profª Cristina
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Tamanho das céls e seus componentes
Unidades de medidas
utilizadas
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1- Confecção de cortes para
microscopia
• Ao natural
• Preservadas
– Fixação:
•
•
•
•
•
Evita Autólise e Proliferação bactérias
Propicia endurecimento celular
Aumenta afinidade a corantes e contrastes
FORMOL e GLUTARALDEÍDO
TETRÓXIDO DE ÓSMIO e GLUTARALDEÍDO
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– Microtomia
• Inclusão
• Corte espessura 1 a 6 μm
• Corantes
– Organelas transparentes
– Corantes Básicos :
•
•
•
•
grupamento cromóforo catiônico (+ carga positiva)
Afinidade por ácidos (aniônicos – carga negativa)
DNA e RNA são basófilas
Ex: azul de toluidina, azul de metileno, hematoxilina
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– Corantes Ácidos :
•
•
•
•
grupamento cromóforo aniônico (: – carga negativa)
Afinidade por bases (catiônicos: + carga positiva)
Proteínas são acidófilas
Ex: Eosina, Fucsina ácida e Orange G
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2- Microscópio Óptico ou de Luz
s
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• Sinônimos para o microscópio óptico:
– Microscópio Comum
– Microscópio de Luz
– Microscópio Fotónico
– Microscópio de Campo Claro
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• Porção mecânica
• Porção óptica
– Sistema óptico de observação
– Sistema óptico de iluminação
O Princípio de funcionamento:
– Condensador: projeta
cone luz material em
observação
– Cone de luz atravessa o
objeto e atinge a
objetiva
– Objetiva: projeta
imagem aumentada no
plano focal da ocular
– Ocular – novamente
aumenta o objeto
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Para uma leitura mais detalhada de como ocorre
a formação da imagem no olho, consulte:
• MARQUES, G. C., UETA, N. Ótica da visão. Disponível
em: http://efisica.if.usp.br/otica/basico/visao/olho/
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• Ampliação do microscópio
= aumento da objetiva X aumento da ocular
• Poder de resolução:
– capacidade de separar detalhes
• É medido pelo Limite de resolução
– Menor distância que deve existir entre dois
pontos, para que eles apareçam individualizados
• O que determina a riqueza dos detalhes:
Poder de resolução
Compr. onda
objetiva
ou
Ampliação ??????
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Outros Microscópios Ópticos
•
•
•
•
Microscópio de Polarização
Microscópio de Contraste de Fase
Microscópio Confocal
Microscópio de Fluorescência
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Polarização
• Foco de luz polarizado
• Estruturas e substâncias celulares dividem o foco de luz em 2
(planos perpendiculares) = estruturas anisotrópica e são
birrefrinfgentes - apresentam índice de refração diferentes
conforme a incidência da luz
• Estruturas isotrópicas – não modificam o plano de polarização
da luz
Em planos
• Prismas:
polarizador (condensador) perpendiculares
permitem a
•
analisador (objetiva)
visualização apenas
das estruturas
birrefringentes
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reflexão
refração
Contraste de Fase
• Transforma as diferenças de fase dos raios
luminosos em diferenças de intensidade
luminosa.
• Fase escura (positiva) e fase clara (negativa)
• Estudo de células vivas
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Comparações
• A) Microscópio óptico comum, B) Contraste de fase POSITIVO, C)
Microscopia interferencial segundo Normasky, D) Contraste de fase
NEGATIVO
Contraste de fase
+
Luz polarizada
Confocal
• Células isoladas e cortes de tecidos – espessura superior ao
plano de foco do microscópio óptico
• Na prática- com o movimento do micromético um plano entra
em foco enquanto os demais saem de foco = PERDA DE
NITIDEZ
• No confocal: varredura por feixe de laser, ponto a ponto =
“CORTE ÓPTICO “
– Resultado: apenas aquela fatia fará parte da formação da imagem =
maior nitidez
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Confocal
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Fluorescência
2-Microscópio Eletrônico
• Transmissão
• Varredura
•
•
•
•
Melhor resolução
Células não vivas
Preparativos
Eletrodensidade
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• Imagens, esquemas e fotos retirados da
internet, através do site:
http://images.google.com.br/imghp?hl=pt-BR&tab=wi
Para estudar:
• Junqueira, L.C., Carneiro, J. Biologia Celular e
Molecular. Guanabara Koogan. 8ª ed. 2005.
– Capítulo 2, p.19-26
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