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DESENVOLVIMENTO DE UM MÉTODO PARA A BUSCA DE SUBSTÂNCIAS
BIOATIVAS
LUANA ANDRADE SANTOS1; RAFAEL CIRO MARQUES CALVACANTE1;
ANA KAROLINA DE SOUZA ANDRADE1; PAULO CESAR VIEIRA2; JAMES
ALMADA DA SILVA1
1
Departamento de Farmácia, Universidade Federal de Sergipe, Lagarto, SE,
Brasil
2 Departamento de Química, Universidade Federal de São Carlos, São Carlos,
SP, Brasil
Introdução: A espécie Himatanthus drasticus (Apocinaceae), conhecida como
“janaguba”, é uma planta que tem sido utilizada na medicina tradicional para
diversos fins terapêuticos, inclusive para o câncer. A busca por substâncias
bioativas por meio de ensaios enzimáticos, é uma ferramenta bastante útil na
descoberta de novos protótipos à fármacos. Por isso, um método, simples e de
baixo custo, foi desenvolvido para a busca de inibidores enzimáticos.
Objetivos: Desenvolver um método para a busca de substâncias bioativas e
avaliar os efeitos inibitórios de extratos dos galhos (HDG) de H. drasticus frente
a papaína. Métodos: O ensaio de inibição enzimática foi desenvolvido
utilizando o método de difusão em gel em placas de petri. Após o estudo de
diversos parâmetros (quantidade de ágar e leite; concentração da papaína,
volume do gel de ágar, tempo de incubação, entre outros), as melhores
condições para o ensaio foram determinadas. Após a solidificação do ágar na
placa, poços foram perfurados para a adição de 45 mL da mistura enzima/
fração teste. O DMSO foi utilizado controle positivo e o inibidor irreversível E64
como controle negativo. Resultados: As melhores condições foram: 50 mL da
mistura ágar nutriente (2%) e leite em pó (0,25%); papaína (400 nM) em
tampão pH 6,7, com EDTA (5 mM); tempo de incubação de 18 h. A atividade
enzimática foi observada por meio da formação de halos (evidentes após
reação com HCl 1 M), provenientes da degradação da caseína do leite, pela
papaína. A diminuição dos halos evidenciou a inibição da atividade enzimática.
Todas os extratos testados (hexano, DCM, AcOEt) foram ativos frente a
papaína, de maneira dose-dependente (100; 200; 400 mg/mL). Na presença do
inibidor E64 não houve a formação de halo, evidenciando a inibição total da
atividade enzimática. Conclusão: O ensaio desenvolvido utilizando a papaína
como alvo para a busca de inibidores de cisteíno proteases, apresentou-se
bastante coerente, após análise dos resultados, podendo ser utilizado para
monitorar a busca de substâncias bioativas em produtos naturais.
Palavras-chave: Himatanthus drasticus; ensaio enzimático; papaína.