FSH - Geraembryo | Reprodução Bovina

Gabriel A. Bó12,Andrés Tríbulo13 , Martín Ramos13
Daniel Carballo Guerrero 13, H. Tribulo13, R. Tribulo13, Pietro Baruselli5 ,
Reuben J. Mapletoft 4
1Instituto
de Reproducción Animal Córdoba (IRAC), Zona Rural General
Paz, (5145) Córdoba, Argentina;
2 Carrera de Medicina Veterinaria, Instituto de Ciencias Básicas y Aplicadas
, Universidad Nacional de Villa María
3Facultad de Ciencias Agropecuarias, Universidad Nacional de Córdoba,
Argentina
4Western College of Veterinary Medicine, University of Saskatchewan,
Saskatoon,
Saskatoon, SK, Canada
5Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade de São Paulo
1
Transferencia de embriones – Superovulación
Necesidad de incrementar el número de embriones
transferibles…
2
Development of follicles ≥4 mm in cattle
Ovulation
Ovulation
Luteal phase
2-wave
FSH
0
9-10
20
Luteal phase
3-wave
FSH
0
8-9
16
22
3
Superovulacion y ondas foliculares
Los tratamientos con FSH deben
iniciarse en el momento de la
emergencia de la onda folicular
para optimizar la respuesta
superovulatoria
Nasser et al., 1993
4
Sincronización de la emergencia de la onda
folicular para la superovulación
• Ablación Folicular – 1.5 días
• Estradiol – 4 días
(5 mg EE-17β o 2 mg EB + P4)
5
1. Protocolo Tradicional
PGF2α
PGF2α
Estro
Estro
+ IA
CE
FSH (12/12h)
D-0
D-10
D-13
D-0
D-7
Estro
+ IA
CE
2. Sincronización de la onda folicular
PGF2α
E2+P4
Estro
P4
FSH (12/12h)
D-0
D-4
D-7
3. Sincronización de la onda folicular y la ovulación
PGF2α
E2+P4
Estro
P4
FSH (12/12h)
D-0
D-4
D-7
D-8
Estro
D-15
EC
GnRH or
LH + AI
D-8
D-15
6
PGF2αα
E + P4
pLH or GnRH 24h
FSH
EC
AI
AI
D9
PM
D10
AM
P4 device
D0
D4
PM
D6
PM
D8
AM
D9
AM
D16
AM
Bó et al., 2006
7
El Estradiol no está
disponible en muchos
países
La ablación folicular no es
fácil de realizar en el campo
Follicle wave emergence - GnRH or pLH
GnRH/pLH
(Ovulation?)
Wave
emergence
Follicle
le Size
~2.0.days
Tasa Ovulatoria:
Ovulatoria: 60
60%
%
FSH
Days
Martinez et al., 1999
9
Respuesta superovulatoria en vacas Holstein luego de la
ablación folicular (FA)/E-17β
β o pLH/GnRH
FA/E-17β
n
pLH/GnRH
54
51
No. de CL
20.1
19.7
Total ova/embriones
8.0
4.9
(40)a
(25)b
Ovocitos fertilizados
4.5
2.6
Emb. Trans.
3.3
2.0
(%)
ab (P
< 0.05)
Mitchell et al., 1998 & Deyo et al., 2001
(Combinados)
Day of follicular wave emergence following GnRH or
pLH in beef heifers
Day
-2
-1
Tx
+1
+2
+3
+4
+5
10
1
1
2
+6
Day 3
Ov (14)
No (4)
1
2
1
Day 6
Ov. (14)
1
No (4)
11
2
3
1
Day 9
Ov. (8)
No (10)
2
2
1
7
4
1
1
2
28
3
4
4
3
Overall
Ov. (36)
No (18)
2
2
1
2
2
1
Ovulation rate: 67%
Martinez et al., 1999
11
Superestimulación después
de la inducción de la ovulación
con GnRH
30
Inducción de la ovulación de un folículo
persistente mediante la aplicación de
GnRH o pLH.
Small et al. (2009)
GnRH
PGF
30 h
P4
Ovulación
Day 0
Day 7-10
13
Ovulación
GnRH
PGF
P4
FSH
P4
14
PGF D12 pm y
D13 am
PGF
GnRH
pLH
Colecta
AI
AI
D14
PM
D15
AM
FSH
Cue-Mate
D0
D7
AM
D8
PM
D12
PM
D13 D14
AM AM
D21
7 días
15
Resultados
Grupos
N
O/E
Totales
GnRH
14
11.5±1.7
9.3±1.5
7.7±1.6
EB + P4 14
Valor P
14.5±2.8
0.80
9.4±2.3
0.92
6.8±1.7
0.85
Ovocitos
Embriones
fertilizados Transferibles
Carballo Guerrero et al., IETS 2010
16
Resultados en Vacas y Vaquillonas
Holstein
Grupos
n
GnRH
E17β + P4
O/E
totales
Embriones
Transferibles
54
8.1±5.5
5.9±4.2
56
10.1±7.1
5.1±4.1
Las medias no difieren.
Fuentes et al., IETS 2010
17
Domingo
Lunes
Martes
Miercoles
Jueves
Viernes
Sabado
Disp.
P4 +
PGF
GnRH
FSH
FSH
FSH
FSH
FSH
(AM)
(PM)
(AM y PM)
(AM y PM)
(AM y PM)
(AM y PM)
PGF
(PM)
FSH
GnRH
(AM)
X P4 +
PGF (AM)
AI (PM)
AI (AM)
Colección
18
19
Primera Reunión del IRAC
Agosto 1989
Primer Experimento del IRAC
23
Ovocitos/embriones
Total
Fert Trans
Tratamiento
n
CL
1 x SC
84
16.6
9.8
7.3
5.3
8 x IM
54
14.9
7.4
5.5
3.8
Adaptado de Bó et al, 1994
24
25
Superestimulación en Vacas Holstein con
Folltropin-V
N
CL
Ovoc./emb
Fertilizados
Transferibles
P<0.05
8 X IM
12
14.0
7.7
7.0
5.6
1 X SC
13
6.4
3.1
2.3
2.3
Lovie et al., 1994
15 ml sc
5 ml sc
13
10.5
5.3
4.7
3.0
Tecnología de Liberación
Lenta usando Polímeros
Evaluar la respuesta superovulatoria en donantes
de embriones tratadas con dos inyecciones
intramusculares de Folltropin-V diluido en un
polímero de liberación lenta (SRF).
28
Superstimulatory Treatments
Control
PGF2α
pLH
5 mg E-17β
50 mg P4
FSH
FTAI
Cue-Mate
0
4
5
6
7
8
9
Embryo
Collection
15
Single Injection
5 mg E-17β
50 mg P4
400 mg
Folltropin-V
in SRF
PGF2α
pLH
FTAI
Cue Mate
0
4
5
6
7
8
9
Embryo
Collection
15
29
Colectas
Embriones
con “0”
Fertilizados
Transferibles embriones
transferibles
Tratamiento
N
O/E
Totales
Control
(8X im)
29
12.3 ± 1.5
7.2 ± 1.1
5.3 ± 0.8
3 (10%)
Inyección
Simple
en SRF (im)
29
13.7 ± 2.1
8.4 ± 1.4
7.1 ± 1.3
4 (13%)
0.93
0.64
0.43
0.68
Valor P
Tribulo et al., IETS 2010
30
Dosis Simple de Folltropin-V en SRF
FSH
PGF2αα
E + P4
pLH 24h
EC
IA
IA
D8
PM
D9
AM
P4 device
D0
D4
D5
D6
D8
AM
D15
31
Colectas con
Embriones
“0”
Transferibles
embriones
transferibles
Tratamiento
N
O/E
Totales
Fertilizados
Control
(8X im)
175
12.1 ± 0.6
8.5 ± 0.5
6.4 ± 0.4
17 (10%)
Inyección
Simple
en SRF (im)
178
11.6 ± 0.7
8.3 ± 0.5
6.5 ± 0.5
23 (13%)
0.10
0.23
0.51
0.34
Valor P
Bo et al., IETS 2010
32
O/E
Totales
Fertilizados
Embriones
Transferibles
Colectas
con “0”
embriones
transferibles
400 mg 46
13.9 ± 1.1 b
9.8 ± 1.0 b
6.5 ± 0.7 b
5
300 mg 46
12.0 ± 1.0 b
9.4 ± 0.9 b
6.1 ± 0.7 b
5
200 mg 46
6.6 ± 0.7 a
5.2 ± 0.6 a
4.0 ± 0.5 a
8
0.0001
0.0001
0.016
0.56
N
Dosis
Valor P
Tribulo et al., IETS 2010
33
Colectas
Embriones
con “0”
Fertilizados
Transferibles embriones
transferibles
N
O/E
Totales
300
37
11.7 ± 1.6
9.4 ± 1.4
7.5 ± 0.9
1
200
37
11.1 ± 1.1
9.0 ± 0.7
7.6 ± 0.7
2
0.92
0.69
0.78
0.55
Dosis
P value
Tribulo et al., IETS 2010
Colectas
Embriones
con “0”
Fertilizados
Transferibles embriones
transferibles
N
O/E
Totales
300
24
15.5 ± 2.1
9.3 ± 1.5
7.5 ± 1.4
5
260
24
15.7 ± 2.0
12.0 ± 1.8
9.5 ± 1.6
1
200
24
11.6 ± 2.4
7.1 ± 1.1
5.0 ± 0.8
3
0.22
0.91
0.87
0.21
Dosis
P value
Tribulo et al., IETS 2010
La superestimulación de donantes con una
sola inyección de Folltropin-V resultó en una
respuesta similar a la obtenida con el
protocolo convencional de 8 dosis cada 12 h y
por 4 días.
No hubo efectos adversos del tratamiento al
crecimiento folicular, el momento de la
ovulación y la calidad embrionaria.
No obstante la concentración de SRF es viscosa
y la dilución de Folltropin-V requiere de
cuidados especiales.
Por lo tanto mas experimentos son necesarios
con concentraciones menores de SRF.
Control
Superstimulatory Treatments
PGF2α
5 mg E-17β
50 mg P4
0
pLH
300 mg FSH
Cue-Mate
4
5
FTAI
6
7
8
9
Embryo
Collection
15
100 mg FSH in
2.5 ml 25% SRF
5 mg E-17β 200 mg FSH in
5 ml 25% SRF
50 mg P4
pLH
PGF2α
FTAI
Cue Mate
0
4
5
6
7
8
9
Embryo
Collection
15
100 mg FSH in
2.5 ml 50% SRF
5 mg E-17β 200 mg FSH in
50 mg P4
5 ml 50% SRF
pLH
PGF2α
FTAI
Cue Mate
0
4
5
6
7
8
9
Embryo
Collection
15
Superovulatory response following a split
intramuscular injection of Folltropin-V in 50% or 25%
SRF
Treatment
n
Ova/embryos
Fertilized ova
Transferable
embryos
Control
29
10.2 ± 1.8 a
6.7 ± 1.3
4.0 ± 0.8
SRF 25%
29
14.3 ± 2.1 b
9.3 ± 1.9
6.1 ± 1.3
SRF 50%
29
14.4 ± 2.0 b
8.9 ± 1.4
5.0 ± 0.9
0.0236
0.3222
0.2439
P-value
Transferencia de
embriones para mejorar la
eficiencia reproductiva de
en vacas de leche
1. Verano
2. Vacas repetidoras (> 3 IA)
COMO HA EVOLUCIONADO LA TASA DE CONCEPCION?
DAIRYTECH, 2008
Capitaine Funes
et al.,dc305
2008
BD usuarios
Tasa de Conce
ncepción (%)
Gráfico de la Tasa de Concepción por Mes (2001)
(113 tambos, 33431 vacas)
52.5
50.0
47.5
45.0
42.5
40.0
37.5
35.0
32.5
30.0
27.5
25.0
22.5
20.0
17.5
15.0
12.5
10.0
7.5
5.0
2.5
0.0
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
MES
Vacas Adultas
Primera Lactancia
Capitaine Funes et al., 2003
Por qué la TE puede resultar en fertilidad
Normal?
– Evita las fases mas críticas
•
•
•
•
Ovocito
Fertilización
Ovulación
Desarrollo embrionario temprano
– No evita:
• Desarrollo Embrionario después del Día 7
• Utero
IMPROVEMENT OF FERTILITY AFTER
EMBRYO TRANSFER IN DAIRY COWS
UNDER HEATHEAT-STRESS CONDITIONS
Jose Luiz M. Vasconcelos
Debora Jardina
Daniela Demetrio
Ricarda Santos
FMVZ UNESP, Botucatu, SP - BRAZIL
Practitioner’s Forum
The use of embryo transfer for improvement of fertility
in dairy cows
MATERIALES Y METODOS
RECEPTORAS – Vacas Holstein Lactando
Donantes - Vacas Holstein No-Lactando
Producción de Leche: 31.4 Kg/día
Freestall con sistema de refrigeración
Octubre 2003 a Septiembre del 2004
Embriones Frescos
Grado 1 o 2
Sincronía Donante-Receptora ±1 día
IA
Todas las Vacas
1 vez por mes
PGF2α
α
PGF2α
α
Día -3
TE
n = 1037
IA
IA
IA
n = 530
CL
Viernes
CEL)
n = 263
Celo
TE
n = 507
n = 186
IA
-2
-1
0
1
SAB
DOM
Lun
Mar
Viernes
Observación de
Celos
TE
2
3
4
5
6
7
Lun
8
Tasa Ovulatoria
84.8 % (328/387)
Parte de la baja “concepción” se puede deber a
que algunas vacas no ovulan.
TE– determinación previa de la ovulación y
posibilidad de re-sincronizar las vacas que no
ovularon antes.
Tasa De Preñez
Todas las Vacas
x
Vacas Ovuladas
IA – 32.6 % (74/227)
x
37.9 % (74/195)
TE – 49.4 % (79/160)
x
59.4 % (79/133)
(p<0.01)
(p<0.01)
Factores que afectaron las
tasas de concepción
1.0
1.0
Probabilidad de Concepción Niveles
de P4 y Producción de Leche
0.8
0.6
0.0
0.2
0.2
0.4
Probabilit y of concept ion rat e day
y2
25
0.6
0.4
AI
0.0
Probability of conception rate day 25
2
0.8
ET
1
2
3
4
P4 concent rat ion on day 7 of est ral cycle (ng/ ml)
5
20
25
30
35
40
Milk product ion (kg/ cow/ day)
45
50
Tasa de Concepción a IA o TE en
vacas Holstein de Alta Producción
Rodrigues, C.A.1, Ayres, H.2, Reis, E.L.2, Nichi, M.2,
Bo, G.A.3; Baruselli, P.S2
1Clínica
Veterinária SAMVET de São Carlos, São CarlosCarlos-SP, Brasil. 2Departamento
de Reprodução Animal, FMVZ – USP, São Paulo – SP, 05508
05508--000, Brasil. 3Instituto
de Reproducción Animal Córdoba (IRAC), Córdoba, Argentina
AI ET
60%
IA
50%
a
a
a
a
40%
TE
a
a
a
a
b
b
20%
b
b
b
b
b
a
a
b
b
30%
a
a
b
b
11
12
b
10%
0%
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
Conception Rates at AI (n= 18.568) or embryo transfer (n= 4.871) in Holstein
cows.
Rodrigues et al SBTE (2007)
Tasa de Concepción a IA o TE en vacas
Holstein Repetidoras (>
(>4 servicios)
Rodrigues, C.A.1, Ayres, H.2, Reis, E.L.2, Nichi,
Nichi, M.2,
Bo, G.A.3; Baruselli, P.S2
1Clínica
Veterinária SAMVET de São Carlos, São CarlosCarlos-SP, Brasil. 2Departamento
de Reprodução Animal, FMVZ – USP, São Paulo – SP, 05508
05508--000, Brasil. 3Instituto
de Reproducción Animal Córdoba (IRAC), Córdoba, Argentina
REPEAT BREEDER (≥4
(≥4 SERVICES)
(AI vs Embryo Transfer
Transfer))
IA
Taxa de Concepção
50%
TE
*
*
*
*
*
*
*
*
*
1
2
3
4
5
6
7
8
9
*
*
*
40%
30%
20%
10%
0%
10
11
12
Mês
5.693 AI and 3.858 Embryo Transfers
Rodrigues et al SBTE (2007)
Grupo 1) Ciclando - PGF2αα (n=229)
TE
PGF2αα
Detección de celo
7 días
D0
D2
D7
D7
Grupo 2) Ciclando (con CL)-TETF (n=208)
BE+P4
400 UI eCG +
0,5 ml ECP + PGF2 α
TETF
D8
D17
P4
D0
Grupo 3) Anestro (sin CL) - TETF (n=221)
BE+P4
400 UI eCG +
0,5 ml ECP + PGF2 α
TETF
D8
D17
P4
D0
90
80
70
60
50
40
30
20
10
0
PGF - Estrus
TETF - CL
75,0
59,4
46,8
39,1
34,5
a
29,3
b
16,2
a
(136/229)
Taxa de
estro
(79/229) (156/208)
Taxa de
aprov.
(42/79)
(67/156)
Taxa de
concepção
b
(37/229) (61/208)
Taxa de
prenhez
Rodrigues et al SBTE (2007)
90
80
70
60
50
40
30
20
10
0
75,0
TETF - CL
TETF - No CL
*
**
61,2
39,1 37,4
29,3
22,9
(156/208) (131/214)
(67/156) (49/131)
(61/208) (49/214)
Taxa de aprov.
Taxa de
concepção
Taxa de prenhez
Rodrigues et al SBTE (2007)
Estradiol vs GnRH
N=390 Vacas en lactancia
eCG (400 UI) +
ECP (1.0 mg) +
PGF
EB
FTET
Crestar
D0
D8
D17
N=394 Vacas en lactancia
eCG (400UI)
+ PGF
GnRH
GnRH
FTET
Crestar
D0
D7
D9
D16
Baruselli et al., 2010
90
80
70
60
50
%
40
30
20
10
0
Estradiol
GnRH
68,0
56,4
36,8 33,6
a
b
20,8 22,8
(220/390) (268/394)
(81/220) (90/268)
(81/390) (90/394
Transferred/
treated
Pregnant/
transferred
Pregnant/
treated
Baruselli et al., 2010
Permite obtener un 90% de hembras
Pero:
Las tasas de preñez son menores a las que
se obtienen usando semen convencional
El costo del semen es tres veces mayor al
del semen convencional
Solo se puede aplicar en Vaquillonas
Los protocolos de IATF con semen sexado
todavía están en desarrollo.
Los tratamientos con FSH deben iniciarse en el momento de
la emergencia de la onda folicular para optimizar la respuesta
superovulatoria
La ablación folicular o estradiol sincronizaran efectivamente la
emergencia de la onda folicular para superestimulacion
El uso de GnRH depende del estadio del foliculo dominante
Los prepre-tratamientos con dispositivos con progesterona por 7
7 días permiten una alta tasa de ovulación inducida con
GnRH (>85%)
(>85%)
Los tratamientos con FSH iniciados en el momento de la
ovulación inducida con GnRH resultan en una respuesta
superovulatoria aceptable, SIN NECESIDAD DE USAR
ESTRADIOL.
Es posible simplificar el tratamiento
superovulatorio mediante la administración de
una dos inyecciones intramusculares de
Folltropin--V diluido en un polímero de
Folltropin
liberación lenta (SRF)
El uso de embriones sexados de bajo costo
puede ser una alternativa viable para los
meses de menor fertilidad o para vacas
repetidoras
MUCHAS GRACIAS !!!!
www.iracbiogen.com.ar