Apresentação do PowerPoint - Encontro de Jovens Pesquisadores

XXII Encontro de Jovens Pesquisadores e IV Mostra Acadêmica de Inovação e Tecnologia
USO DE ETANOL NA RECUPERAÇÃO E PURIFICAÇÃO DO LACTOBIONATO DE SÓDIO
OBTIDO POR ENZIMAS IMOBILIZADAS DE Zymomonas mobilis
PROBIC/FAPERGS
Daniela Cauzzi Rodrigues, Natalia Moreno Conceição Beraldo, Sabrina Carra,
Mauricio Moura da Silveira, Eloane Malvessi
Instituto de Biotecnologia – Laboratório de Bioprocessos
Projeto: GFOR2 E-mail: [email protected]
INTRODUÇÃO
METODOLOGIA ANALÍTICA:
Ácido lactobiônico: ácido orgânico de alto valor comercial, utilizado
na área médica e cosmética (SUMIMOTO e KAMADA, 1990; KIM e KIM, 2003;
•
Concentração de células: gravimetria
BARQUET et al., 2006).
•
Substratos e produtos da precipitação: HPLC – coluna Aminex HPX87H, fase móvel H2SO4 0,50 mM, vazão 0,6mL/min, 60°C.
Sorbitol: poliálcool empregado na indústria farmacêutica e de
alimentos (SILVEIRA e JONAS, 2002).
Consistem em produtos da bioconversão de lactose e frutose,
respectivamente, em reação catalisada pelas enzimas glicose frutose
oxidorredutase (GFOR) e gluconolactonase (GL) de Zymomonas mobilis
(ZACHARIOU e SCOPES, 1986).
Ao final da bioconversão, os produtos devem ser separados da
mistura reacional que contém, ainda, substratos residuais.
RESULTADOS
Recuperação de lactobionato de sódio do caldo de bioconversão com células
imobilizadas de Zymomonas mobilis, utilizando 75 e 60% (v/v) de etanol.
OBJETIVO
Avaliar a recuperação e purificação de lactobionato de sódio obtido
por enzimas imobilizadas de Zymomonas mobilis por precipitação com
etanol.
MATERIAL E MÉTODOS
Microrganismo: Zymomonas mobilis ATCC 29191
Meio de cultivo: glicose e sais nutrientes (Malvessi et al., 2006)
Cultivo de Z. mobilis
(5,5L, 30°C,400rpm, 12h, pH 5,5
Inóculo (0,45L),
30°C, 200rpm, 12h
Ativação
celular
Imobilização celular em
alginato de cálcio
Permeabilização celular
(CTAB 0,2% (m/v))
Caldo de bioconversão:
produtos formados e
substratos residuais
Bioconversão: 20g/L de células; 200mL de solução
frutose (0,6mol/L) + lactose (0,7mol/L); pH6,4; 39°C
PRECIPITAÇÃO
4°C, 24h
Sobrenadante
Precipitação
1
2
3
A
86
75
67
Recuperação em triplicatas (%)
Etanol 75% (v/v)
Etanol 60%(v/v)
B
C
A
B
91
88
83
82
82
81
67
67
74
72
58
61
Purificação de lactobionato de sódio do caldo de bioconversão com células
imobilizadas de Zymomonas mobilis, utilizando 75 e 60% (v/v) de etanol,
após três precipitações.
Triplicatas
Etanol 75% (v/v)
Etanol 60% (v/v)
A
81
99
B
61
86
C
70
94
CONCLUSÕES
O processo de precipitação com etanol é viável para a
recuperação e purificação do lactobionato de sódio obtido via
processo de bioconversão com células imobilizadas de Z. mobilis.
Nas condições avaliadas, foi observado que a vazão de adição
de etanol, temperatura e a mistura influenciaram o rendimento em
lactobionato obtido com a precipitação em etanol.
Perspectivas: otimização do método usando Box-Behnker Design
(BBD), com a avaliação do efeito da temperatura, teor e vazão de
adição do solvente sobre o rendimento final de lactobionato.
REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS
Análises
Precipitação com
etanol 60 e 75% (v/v),
agitação magnética
Precipitado
Ressuspenso em água destilada
A etapa de precipitação foi repetida 3 vezes, obtendo-se precipitados
(1, 2 e 3) e sobrenadantes (1, 2 e 3) em cada batelada.
Todos os testes foram realizados em triplicata.
C
82
68
55
BARQUET, A. P.; FINCH, A. P.; KOESTERS, L. S. Rev. Bras. Farm. 87:67-73, 2006
KIM, I.; KIM, S. Int . J. Pharm. 257:195-203, 2003
MALVESSI et al Braz. Arch. Biol. Technol. 49: 139-144, 2006
SILVEIRA, M.M.; JONAS, R. Appl. Microbiol. Biotechnol. 59:400-408, 2002
SUMIMOTO, R.; KAMADA, N. Transpl. Proc. 22:2198-2199, 1990
ZACHARIOU, M.; SCOPES, R. K. J. Bacteriol.3:863-869, 1986
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