de pdf - CenterKit | Produtos e Equipamentos de

HDL LE
Ref.: 98
Instruções de Uso
MS 10009010057
Finalidade . Sistema para determinação homogênea direta do
colesterol HDL em soro e plasma.
[Somente para uso diagnóstico in vitro.]
Princípio . A seletividade do método está baseada nas tecnologias de
aceleração da reação da colesterol oxidase (CO) com o colesterol livre
das lipoproteínas não HDL e solubilização seletiva das partículas HDL por
ação de um detergente específico.
Na primeira fase da reação, o colesterol livre das partículas não HDL é
submetido a uma reação enzimática catalisada pela colesterol oxidase
(CO) na presença de Acelerador. O peróxido de hidrogênio produzido é
consumido por uma reação da peroxidase com disulfobutilmetatoluidina
sódica (DSBmT) formando um produto incolor.
A segunda reação utiliza um detergente capaz de solubilizar
especificamente o colesterol HDL. Com a ação das enzimas colesterol
esterase (CE) e colesterol oxidase e acoplamento com 4-aminoantipirina
e o cromogênio DSBmT, em reação catalisada pela peroxidase, ocorre o
desenvolvimento de coloração proporcional à concentração de colesterol
HDL na amostra.
HDL, LDL, VLDL
e Quilomicrons
Acelerador +CO
DSBmT+Peroxidase
L DL, Quilomicrons + HDL
e VLDL não reagentes
Detergente seletivo
HDL
Colesterol HDL solubilizado
Colesterol esterase
Colesterol HDL solubilizado
Colestenona + H2O2
Colesterol oxidase
Peroxidase
H2O2 + DSBmT + 4-aminoantipirina
Antipirilquinonimina + 4 H2O
Características do sistema . Devido à importância da medição
exata do colesterol HDL, é desejável utilizar um método de referência.
O método de referência que combina a ultracentrifugação com
precipitação química para separar as HDL, dosando o colesterol com o
método de Abell-Kendall, é intensivo em tempo e operações e tem
6
aplicação limitada no laboratório clínico .
O sistema HDL LE da Labtest Diagnóstica é um método homogêneo
líquido para medição direta do colesterol HDL e consiste em um processo
simples e bem definido que transmite confiança na exatidão da
metodologia. O método possui excelente correlação com o Método
3
Designado de Comparação (MDC) e apresenta características de
precisão e exatidão que superam significativamente os requisitos
mínimos de desempenho propostos pelo Programa Nacional de
1
Educação em Colesterol (NCEP), em vigor desde 1998 .
01 Português - Ref.: 98
A especificidade desejada é conseguida com ação do detergente
presente no reagente 2 cujas propriedades solubilizam somente o
colesterol HDL.
Concentrações de triglicérides até 1800 mg/dL, bilirrubina até 60 mg/dL,
hemoglobina até 1000 mg/dL e ácido ascórbico até 100 mg/dL não
interferem significativamente na reação.
O sistema de calibração é referenciado ao SRM 1951 do National Institute
of Standards and Technology (NIST), que lhe garante característica única
de rastreabilidade.
A flexibilidade do método torna-o facilmente aplicável em analisadores
automáticos capazes de processar reação de ponto final com dois
reagentes e medição em 600 nm.
Metodologia . Acelerador-Detergente Seletivo.
Reagente
1.
1 - Reagente 1 - Armazenar entre 2 - 8 ºC.
Contém tampão pH 6,0; colesterol oxidase <1000 U/L, peroxidase
<1300 U/L, DSBmT <1 mmol/L, acelerador <1 mmol/L e azida sódica
0,06%.
2.
2 - Reagente 2 - Armazenar entre 2 - 8 ºC.
Contém tampão pH 6,0; colesterol esterase <1500 U/L,
4-aminoantipirina <1 mmol/L, ascorbato oxidase <3000 U/L,
detergente <2% e azida sódica 0,06%.
3.
- Calibrador - Concentração no rótulo do frasco. Armazenar
entre 2 - 8 ºC.
Reagente liofilizado. Preparação contendo HDL humano, tampão 50 mM,
cloreto de sódio >150 mM e estabilizadores <15%.
Os reagentes não abertos quando armazenados nas condições indicadas
são estáveis até a data de expiração impressa no rótulo.
Os Reagentes 1 e 2, quando mantidos em bandeja refrigerada no
equipamento, são estáveis por 4 semanas. Este período de estabilidade
pode ser modificado em função das características e condições de
manutenção do equipamento. Portanto, sugere-se que o controle da
qualidade seja utilizado para monitorar o desempenho dos reagentes. Os
reagentes após abertos quando armazenados bem vedados entre
2 e 8 ºC e não submetidos a contaminações química ou microbiana, são
estáveis até a data de validade indicada no rótulo.
Precauções e cuidados especiais
Os cuidados habituais de segurança devem ser aplicados na
manipulação dos reagentes, que não devem ser pipetados com a boca.
O calibrador contém derivados de sangue humano e apresentou
resultados negativos para a presença de HBsAg e anticorpos HCV e HIV
utilizando testes aprovados. Entretanto, nenhum teste conhecido pode
assegurar que produtos derivados de sangue humano não transmitam
doenças infecciosas. Portanto, recomenda-se manuseá-lo como sendo
potencialmente infectante, seguindo as normas estabelecidas para
biossegurança.
Os reagentes contêm azida sódica que é tóxica. Deve-se tomar cuidado
para evitar a ingestão e no caso de contato com os olhos deve-se lavar
imediatamente com grande quantidade de água e procurar auxílio
médico. A azida pode formar compostos altamente explosivos com
tubulações de chumbo e cobre. Portanto, utilizar grandes volumes de
água para descartar os reagentes.
Materiais necessários e não fornecidos
1. Fotômetro capaz de medir com exatidão a absorbância em 600 nm.
2. Incubador ou banho-maria a 37 ºC.
3. Pipetas para medir amostras e reagentes.
4. Cronômetro.
Amostra
Usar soro ou plasma (heparina lítio e EDTA). Amostras com citrato ou
oxalato não devem ser usadas porque produzem resultados falsamente
diminuídos. As amostras de soro ou plasma não devem permanecer entre
15 - 30 ºC por mais de 14 horas. Quando as medições não são
completadas dentro de 14 horas, as amostras podem ser armazenadas
entre 2 - 8 ºC por 7 dias e por 30 dias a 20 ºC negativos. Deve-se
armazenar em temperaturas ≤70 ºC negativos quando houver
necessidade de preservação por períodos maiores de tempo. Evitar
congelamentos e descongelamentos repetidos. Amostras
descongeladas devem ser bem misturadas antes da utilização. Não usar
vórtex ou similar. Não usar amostras com sinais de contaminação
microbiana.
Como nenhum teste conhecido pode assegurar que amostras de sangue
não trasmitem infecções, todas elas devem ser consideradas como
potencialmente infectantes. Portanto, ao manuseá-las deve-se seguir as
normas estabelecidas para biosegurança.
Para descartar os reagentes e o material biológico sugerimos aplicar as
normas locais, estaduais ou federais de proteção ambiental.
Interferências
Concentrações de bilirrubina total até 60 mg/dL, hemoglobina até
1000 mg/dL, ácido ascórbico até 100 mg/dL, gamaglobulinas até
5000 mg/dL e triglicérides até 1800 mg/dL não interferem
significativamente na reação.
As amostras contendo concentrações dos interferentes maiores que os
acima referidos devem ser diluídas em NaCl 150 mmol/L (0,85%) antes
de se realizar os ensaios. Multiplicar o resultado obtido pelo fator de
diluição.
Preparo do calibrador .
Adicionar 1,0 mL de água, qualidade
reagente (ver Observação no. 2), ao conteúdo do frasco de calibrador.
Deixar em repouso durante 5 minutos. Misturar por inversão suave
evitando a formação de espuma. Estável 7 dias entre 2 - 8 ºC e 30 dias a
20 ºC negativos em recipiente hermeticamente fechado para evitar
evaporação do solvente. Para evitar congelamentos e descongelamentos
repetidos, sugerimos separar o calibrador em alíquotas antes de
congelar. Após descongelar, homogeneizar bem antes da utilização. Não
usar vórtex ou similar.
Procedimento
Este procedimento não se aplica em analisadores semi-automáticos que
utilizam unicamente cubeta de fluxo. Estão disponíveis aplicações para
sistemas automáticos e semi-automáticos.
Rotular 2 tubos de ensaio e proceder como a seguir:
Teste
Amostra
Calibrador
Reagente 1
0,75 mL
0,01 mL
0,75 mL
Misturar e incubar a 37 ºC durante 5 minutos. O nível da água no banho
deve ser superior ao nível dos reagentes nos tubos de ensaio. Determinar
as absorbâncias A1 do teste e do calibrador em 600 nm, acertando o zero
com água deionizada.
Reagente 2
0,25 mL
0,25 mL
Manter a 37 ºC durante 5 minutos. Determinar as absorbâncias A2 do
teste e calibrador em 600 nm, acertando o zero com água deionizada. As
absorbâncias são estáveis por 60 minutos. Se o fotômetro utilizado
possuir recursos para leitura bicromática, utilizar um filtro primário com
emissão em 600 nm e um filtro secundário com emissão entre 660 e
700 nm.
Cálculos . Ver linearidade.
A primeira leitura da absorbância (A1) deve ser corrigida para o volume
final da reação obtendo-se A1cor, antes de realizar o cálculo da
concentração de HDL.
A1cor = A1 x 0,75
Teste (A2 -A1cor)
Colesterol HDL (mg/dL) =
x CC
Calibrador (A2 -A1cor)
CC: concentração do calibrador
Exemplo
Os dados foram obtidos com leituras bicromáticas 600/700 nm:
Teste: A1 = 0,004
Calibrador: A1 = 0,002
02 Português - Ref.: 98
Calibrador
0,01 mL
A1cor = 0,003
A1cor = 0,0015
A2 = 0,080
A2 = 0,085
Concentração do Calibrador: 45,7 mg/dL
0,080-0,003
Colesterol HDL (mg/dL) =
x 45,7 = 42,1
0,085-0,0015
Devido a grande reprodutibilidade que pode ser obtida com a
metodologia, o método do fator pode ser empregado.
CC
FATOR =
Calibrador (A2 - A1cor)
Colesterol HDL (mg/dL) = Teste (A2 -A1cor) x Fator
Exemplo
45,7
Fator =
= 547
0,085-0,0015
Colesterol HDL (mg/dL) = (0,080-0,003) x 547 = 42,1
Valores desejáveis ou recomendados . Os valores a seguir
substituem os valores de referência e foram determinados a partir de
dados epidemiológicos tratados estatisticamente, que relacionam as
concentrações do colesterol com a prevalência de doença coronariana
isquêmica (DCI).
Adultos . Classificação ATP III - Colesterol Total, LDL e HDL (mg/dL)
2
Colesterol Total
Desejável
Limiar elevado
Elevado
<200
200 - 239
≥240
Colesterol LDL (mg/dL)
Ótimo
Limiar ótimo
Limiar elevado
Elevado
Muito Elevado
<100
100 - 129
130 - 159
160 - 189
≥190
Calibração
O calibrador é rastreável ao Standard Reference Material (SRM) 1951 do
National Institute of Standards and Technology (NIST).
Calibrações manuais
Obter o fator de calibração ao usar novo lote de reagentes ou quando o
controle da qualidade indicar.
Sistemas automáticos
Branco de reagentes: água ou solução de cloreto de sódio 150 mmol/L
(0,85%);
Padrão: usar o calibrador do produto;
Intervalos de calibração;
Calibração de 2 pontos ao mudar de lote;
Calibração de 2 pontos quando o controle da qualidade indicar.
Linearidade
A reação é linear entre 2,5 e 200 mg/dL. Em casos raros de valores
maiores que 200 mg/dL, diluir a amostra com NaCl 150 mmol/L (0,85%),
realizar nova determinação e multiplicar o resultado obtido pelo fator de
diluição.
Controle interno da qualidade . O laboratório deve manter um
programa de controle interno da qualidade que defina claramente os
regulamentos aplicáveis, objetivos, procedimentos, critérios para
especificações da qualidade e limites de tolerância, ações corretivas e
registro das atividades. Materiais de controle devem ser utilizados para
avaliar a imprecisão e desvios da calibração. Recomenda-se utilizar um
sistema de regras de controle para verificar a estabilidade do sistema de
7
medição .
Sugere-se utilizar as preparações estabilizadas da linha Qualitrol e
Qualitrol H da Labtest para controle interno da qualidade em ensaios de
química clínica.
03 Português - Ref.: 98
Colesterol HDL (mg/dL)
Baixo
Elevado (Desejável)
<40
≥60
9
Crianças e Adolescentes
Colesterol Total (mg/dL)
Idade: 2 a 19 anos
Desejável
Limítrofe
Elevado
<170
170 - 199
≥200
Colesterol LDL (mg/dL)
Idade: 2 a 19 anos
Desejável
Limítrofe
Elevado
Colesterol HDL (mg/dL)
<10 anos
10 a 19 anos
<110
110 - 129
≥130
Desejável
Desejável
≥40
≥35
Características de desempenho8
Efeitos da diluição da matriz . Uma amostra com valor igual a
Exatidão . A exatidão do método foi verificada por comparação com o
200 mg/dL foi utilizada para avaliar a resposta do sistema nas diluições
da matriz com NaCl 150 mmol/L (0,85%). Os desvios máximos
encontrados em relação à linha de linearidade foram iguais ou menores
que 5%.
3
MDC sendo obtidos os seguintes resultados:
Método Designado
de Comparação
(MDC)
Número de amostras
Intervalo (mg/dL)
Média (mg/dL)
Equação da regressão
Coeficiente de correlação
Significado clínico . Existem fortes evidências de que o colesterol é
HDL LE
52
52
33,6 - 133,0
32,0 - 133,0
56,3
58,3
HDL LE = 0,99* (MDC)+2,81 mg/dL
0,996
O erro total (aleatório + sistemático),estimado em um nível de decisão
igual a 40 mg/dL, é igual a 4,39 mg/dL ou 11,0%.
Especificidade . Para avaliar a especificidade do método em
amostras com triglicérides elevados, foi realizado um estudo utilizando
amostras com concentrações de triglicérides maiores que 400 mg/dL
(431 a 2807 mg/dL), sendo obtidos os seguintes resultados na
6
comparação com o método de referência do CDC :
um fator de risco direto para Doença Coronariana Isquêmica (DCI).
Estudos retrospectivos e prospectivos demonstram claramente uma
interrelação curvilinear entre os níveis do colesterol sérico, mais
especificamente o colesterol LDL, e a prevalência de DCI.
Em 1977 foi demonstrado que o colesterol HDL tem um efeito protetor
contra a prevalência da DCI. Os estudos de Framinghan mostraram de
modo inequívoco que os níveis do colesterol HDL são inversamente
proporcionais à prevalência da DCI. Esta relação inversa é claramente
percebida na tabela de valores desejáveis ou recomendados.
As concentrações do colesterol nas frações LDL e VLDL e na fração HDL
dependem de metabolismos distintos e não se deve fazer qualquer
tentativa de buscar correlação entre seus valores de concentração.
Observações
1. A limpeza e secagem adequadas do material utilizado são fatores
fundamentais para a estabilidade dos reagentes e obtenção de resultados
corretos.
Método Referência
(MR)
Número de amostras
Intervalo (mg/dL)
Média (mg/dL)
Equação da regressão
Coeficiente de correlação
HDL LE
41
41
23,7 - 47,4
26,0 - 47,0
37,9
35,6
HDL LE = 1,01* (MR)-2,48 mg/dL
0,968
O erro total (aleatório + sistemático), estimado em um nível de decisão
igual a 40 mg/dL, é igual a 4,06 mg/dL ou 10,2%.
Repetitividade - Imprecisão intra-ensaio
Amostra 1
Amostra 2
Amostra 3
N
20
20
20
Média
32,9
50,6
101,4
DP
0,3
0,2
0,7
CV (%)
DP
0,4
0,7
1,1
CV (%)
0,9
0,4
0,7
Reprodutibilidade - Imprecisão total
Amostra 1
Amostra 2
Amostra 3
N
40
40
40
Média
32,8
50,0
100,1
1,2
1,4
1,1
Sensibilidade metodológica . Utilizando-se a absorbância do
calibrador como parâmetro, a sensibilidade fotométrica é 0,57 mg/dL,
correspondendo a uma absorbância igual a 0,001.
04 Português - Ref.: 98
2. O laboratório clínico tem como objetivo fornecer resultados exatos e
precisos. A utilização de água de qualidade inadequada é uma causa
potencial de erros analíticos. A água utilizada no laboratório deve ter a
qualidade adequada a cada aplicação. Assim, para preparar reagentes,
usar nas medições e para uso no enxágüe final da vidraria, a água deve ter
resistividade ≥1 megaohm.cm ou condutividade ≤1 microsiemens/cm e
concentração de silicatos <0,1 mg/L. Quando a coluna deionizadora está
com sua capacidade saturada ocorre liberação de vários íons, silicatos e
substâncias com grande poder de oxidação ou redução que deterioram
os reagentes em poucos dias ou mesmo horas, alterando os resultados
de modo imprevisível. Assim, é fundamental estabelecer um programa de
controle da qualidade da água.
3. Vários
fatores alteram os resultados obtidos com o calibrador.
Dentre estes fatores estão os erros de reconstituição, homogeneização,
contaminação da água ou vidraria, controle inadequado da temperatura
ou erros técnicos associados ao instrumento. Sugerimos o cumprimento
das boas práticas de laboratório e a verificação das instruções do
fabricante do instrumento e dos reagentes utilizados, relacionadas com
as limitações do procedimento.
4. O valor do calibrador foi estabelecido utilizando o procedimento e o
sistema HDL LE (Ref. 98) conforme descrito nas instruções de uso.
A exatidão da calibração poderá não ser adequada quando for utilizado
reagente de outro fabricante.
Referências
Estão disponíveis aplicações para sistemas automáticos.
1. Bachorik PS, Ross JW. Clin Chem 1995;41:1414-33.
O número de testes em aplicações automáticas depende dos
parâmetros de programação.
2. Executive Summary of the Third report of the National Cholesterol
Education Program (NCEP) Expert Panel on Detection, Evaluation, and
Treatment of High Blood Cholesterol in Adults (Adult Treatment Panel
III). JAMA 2001;285:2486-97.
3. Kimberly MM, Leary ET, Waymack PP. Clin Chem 1999;45:1803-12.
4. Pesce AJ, Kaplan LA. Methods in Clinical Chemistry, St. Louis: The C.V.
Mosby Co., 1987:1179-1194.
Informações ao consumidor
[Termos e condições de garantia]
A Labtest Diagnóstica garante o desempenho deste produto dentro das
especificações até a data de expiração indicada nos rótulos, desde que os
cuidados de utilização e armazenamento indicados nos rótulos e nestas
instruções sejam seguidos corretamente.
5. Virella MFL, Stone P, Ellis S, Colwell G. Clin Chem 1977;23:882-884.
6. Warnick RG, Wood PD. Clin Chem 1995; 41:1427-33.
Labtest Diagnóstica S.A.
7. Westgard JO, Barry PL, Hunt MR, Groth T. Clin Chem 1981; 27:493501.
CNPJ: 16.516.296 / 0001 - 38
Av. Paulo Ferreira da Costa, 600 - Vista Alegre - CEP 33400-000
Lagoa Santa . Minas Gerais Brasil - www.labtest.com.br
8. Labtest: Dados de Arquivo.
Serviço de Apoio ao Cliente
e-mail: [email protected]
0800 031 34 11 (Ligação Gratuita)
9. Leite PF, Martinez TLR, Halpern A, Cendoroglo MS, Novazzi JP, Fonseca
FAH, Dias JCA. Risco cardiovascular: fatores metabólicos e
nutricionais: diagnóstico e tratamento. São Paulo: Loyola, 1994. p.56.
Apresentação
Produto
Referência
Conteúdo
1
98-80
2
1
HDL LE
98-320
2
1
98-8000
05 Português - Ref.: 98
2
1 X 60 mL
1 X 20 mL
1 X 1,0 mL
1 X 240 mL
1 X 80 mL
1 X 1,0 mL
3 X 2000 mL
1 X 2000 mL
1 X 1,0 mL
Revisão: Março, 2013
Ref.: 280113
Copyright by Labtest Diagnóstica S.A.
Reprodução sob prévia autorização
Símbolos utilizados com produtos diagnósticos in vitro
Símbolos usados con productos diagnósticos in vitro
Symbols used with ivd devices
Conteúdo suficiente para < n > testes
Contenido suficiente para < n > tests
Contains sufficient for < n > tests
Risco biológico
Riesgo biológico
Biological risk
Data limite de utilização (aaaa-mm-dd ou mm/aaaa)
Estable hasta (aaaa-mm-dd o mm/aaaa)
Use by (yyyy-mm-dd or mm/yyyy)
Marca CE
Marcado CE
CE Mark
Material Calibrador
Material Calibrador
Calibrator Material
Tóxico
Tóxico
Poison
Material Calibrador
Material Calibrador
Calibrator Material
Reagente
Reactivo
Reagent
Limite de temperatura (conservar a)
Temperatura limite (conservar a)
Temperature limitation (store at)
Fabricado por
Elaborado por
Manufactured by
Representante Autorizado na Comunidade Europeia
Representante autorizado en la Comunidad Europea
Authorized Representative in the European Community
Número do lote
Denominación de lote
Batch code
Consultar instruções de uso
Consultar instrucciones de uso
Consult instructions for use
Controle
Control
Control
Número do catálogo
Número de catálogo
Catalog Number
Controle negativo
Control negativo
Negative control
Adições ou alterações significativas
Cambios o suplementos significativos
Significant additions or changes
Controle positivo
Control positivo
Positive control
Produto diagnóstico in vitro
Dispositivo de diagnóstico in vitro
In vitro diagnostic device
Controle
Control
Control
Liofilizado
Liofilizado
Lyophilized
Corrosivo
Corrosivo
Corrosive
Período após abertura
Período post-abertura
Period after-opening
06 Português - Ref.: 98
Ref.: 201112