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Anti-C, Anti-E, Anti-c, Anti-e MONOCLONAL
0843
Para técnicas em Tubo, Microplaca e Lâmina
Grupos sanguíneos
Determinação qualitativa de antígeno C, c, E, e em células vermelhas
IVD
Conservar a 2-8ºC
PRINCÍPIO DO MÉTODO
O reagente causa a aglutinação direta das células vermelhas teste que carregam o antígeno Rh
correspondente. A ausência de aglutinação geralmente indica a ausência do antígeno Rh correspondente
(ver LIMITAÇÕES).
SIGNIFICADO CLÍNICO
Levine e Stetson descobriram o grupo sanguíneo Rh em 1940. Além do antígeno D, os outros maiores
antígenos Rh são C, E, c, e. O antígeno D é altamente imunogênico; os antígenos C e e são menos
imunogênicos que E e c. Os anticorpos correspondentes são todos clinicamente significativos, pois
podem causar reações transfusionais e Doenças Hemolítica dos Recém-Nascido.
D
C
E
c
e
C. Técnica ID-Cartões DiaMed
1. Preparar uma suspensão de hemácias teste lavadas à 0,8% em ID-Diluent.
2. Retirar a cobertura de alumínio das colunas que serão utilizadas.
3. Pipetar na coluna apropriada: 50μl da suspensão de hemácias teste e 25μl do reagente Anti-Rh.
4. Centrifugar o ID-Cartão gel na ID-Centrífuga DiaMed.
5. Ler macroscopicamente a aglutinação.
85
70
30
80
98
D.
Antígenos Rh (freqüência na população caucasiana)
REAGENTES
Os reagentes de grupo sanguíneo IgM Anti-Rh Spinreact são reagentes de baixa proteína contendo
anticorpos monoclonais diluídos em cloreto de sódio 0,9%, contendo
albumina bovina 6% e
potencializadores macromoleculares. Cada reagente é fornecido em uma diluição ótima para ser usado
com todas as técnicas recomendadas, sem a necessidade de diluição ou adição posterior. O número de
referência do lote e a data de validade estão impressos nas etiquetas individuais dos frascos.
Reagente
Anti-C
Anti-E
Anti-c
Anti-e
Linha Celular /Clone
MS-24
MS-258
MS-33
MS-16 + MS-63
PRECAUÇÕES
1. O reagente é somente para uso em diagnóstico in vitro.
2. Se o frasco estiver rachado ou vazando, descartar o conteúdo imediatamente.
3. Não utilizar reagentes fora da data de vencimento (ver etiquetas).
4. Não utilizar os reagentes se houver presença de precipitados.
5. Durante a manipulação dos reagentes, deve-se utilizar equipamentos de proteção individual
(EPI),
como luvas descartáveis e aventais de proteção (jalecos)
6. O reagente foi esterilizado por filtração através de um filtro de 0.2 µm para reduzir
contaminação.
Uma vez que o frasco for aberto, o conteúdo permanece viável até a data de vencimento, desde que não
haja nenhuma turbidez que indique contaminação ou deterioração.
7. Este reagente possui azida sódica <0,1% e é classificado pelas Diretrizes aplicáveis da comunidade
Européia (CE) como nocivo (Xn).
8. Os materiais usados foram testados como negativos para HBsAg e anticorpos anti HIV1+2 e HCV com
técnicas microbiológicas aprovadas.
9. Nenhum teste pode garantir que produtos derivados de fontes animais ou humanas estejam livres de
agentes infecciosos, portanto, todo cuidado deve ser tomado no manuseio e descarte de cada frasco e
seu conteúdo.
NOTAS
1. Recomenda-se que sejam testados um Controle Positivo e um Controle Negativo em paralelo a cada
bateria de testes. O teste deve ser considerado inválido se os controles não demonstrarem os resultados
esperados.
2. Quando tipificar células vermelhas de um paciente é importante que um controle negativo seja incluído,
pois os potencializadores macromoleculares do reagente podem causar reações falso positivas com
células revestidas com IgG.
3. Os antígenos Rhesus fracos são pobremente detectados pela técnica de cartões de gel, placa e lâmina.
Recomenda-se o uso da técnica de tubos..
4. Nas Técnicas Recomendadas um volume corresponde a aproximadamente 40µl, quando usando o
conta-gotas fornecido com o frasco.
5. O uso dos reagentes e a interpretação dos resultados devem ser realizados por pessoal treinado e
qualificado, de acordo com os requerimentos do país onde o reagente está sendo usado.O usuário deve
determinar a adequação do reagente para o uso em outras técnicas.
CONSERVAÇÃO
Os frascos originais devem ser armazenados de 2-8ºC. Não congelar. O armazenamento prolongado a
temperaturas fora das especificações pode resultar em perda acelerada da reatividade.
MATERIAL NECESSÁRIO
Bastões aplicadores
Leitor de placas automático
Lâminas de vidro de microscopia
Tubos teste de vidro (10 x 75 mm ou 12 x 75 mm).
Agitador de placas
Tampão salina fosfato (PBS)-NaCl 0,9% pH 7,0 ± 0,2 à 22ºC ± 1ºC ou Solução Fisiológica
0,9%.
Controle de células vermelhas positivo e negativo
Tubos teste de centrífuga
Pipetas volumétricas
Centrífuga de microplacas
Microplacas “U” validadas
ID-Cartões DiaMed (Neutral).
ID-Centrífuga DiaMed.
ID-Diluente DiaMed (ID-CellStab).
AMOSTRAS
As amostras de sangue colhidas com ou sem anticoagulante. Se ocorrer algum atraso no teste, armazenar
as amostras a 2-8ºC. As amostras colhidas em EDTA ou citrato devem ser analisadas em 48 horas. As
amostras colhidas em ACD, CPD ou CPDA-1 podem ser testadas até 35 dias após a coleta. Todas as
amostras devem ser lavadas no mínimo duas vezes com tampão PBS ou Solução Fisiológica 0,9% antes
de serem testadas. Amostras com evidência de lise podem fornecer resultados não confiáveis.
TECNICAS RECOMENDADAS
A. Técnica em Tubo
1. Preparar uma suspensão das células vermelhas a testar à 2-3%, lavadas em PBS ou Solução
Fisiológica 0,9%.
2. Colocar em um tubo etiquetado: 1 volume de Reagente anti-Rh Spinreact e 1 volume da
suspensão de
células vermelhas a testar.
3. Misturar totalmente e centrifugar todos os tubos por 20 segundos a 1000 rcf ou por tempo e
força
alternativos adequados..
4. Ressuspender a base de células vermelhas suavemente e ler a aglutinação
macroscopicamente.
5. Qualquer tubo apresentando um resultado negativo ou questionável, deve ser incubado por 15
minutos
a temperatura ambiente.
6. Após a incubação repetir os passos 3 e 4.
GSIS10-P
B. Técnica em Lâmina
1. Preparar uma suspensão de células vermelhas a testar a 35-45% em PBS ou Solução
Fisiológica 0,9%.
2. Colocar em uma lâmina de vidro marcada: 1 volume de suspensão de células vermelhas a
estar e 1 volume de Reagente Anti-Rh Spinreact
3. Usando um bastão aplicador limpo, misturar os reagentes em uma área de cerca de 20x40mm.
4. Inclinar vagarosamente a lâmina por 30 segundos com agitações posteriores ocasionais
durante um período de 2 minutos mantendo a temperatura ambiente.
5. Ler macroscopicamente após 2 minutos em uma luz difusa e não confundir a presença de
fibrina com aglutinação.
6. Qualquer reação fraca deve ser repetida pela técnica do tubo.
26/02/13
Técnica em Microplaca Usando Cavidades em “U”
1. Preparar uma suspensão de células vermelhas a testar a 2-3% lavadas em PBS ou Solução
Fisiológica 0,9%.
2. Colocar na cavidade adequada: 1 volume de suspensão de células vermelhas a testar e 1
volume de Reagente Anti-Rh Spinreact
3. Misturar totalmente, preferivelmente com um agitador de microplacas, tomando cuidado para
evitar a contaminação cruzada de cavidades.
4. Incubar a temperatura ambiente por 15 minutos.
5. Centrifugar a microplaca por 1 minuto a 140rcf ou por tempo e força alternativos adequados.
6. Ressuspender suavemente a base de células vermelhas usando agitação controlada em um
agitador de microplacas.
7. Ler a aglutinação macroscopicamente ou com um leitor validado.
8. Qualquer reação fraca deve ser repetida pela técnica do tubo.
INTERPRETAÇÃO DOS RESULTADOS
1. Positivo: A aglutinação das células vermelhas teste constitui um resultado positivo e, dentro
das limitações aceitas do procedimento, indicam a presença do antígeno Rh apropriado nas células a testar.
2. Negativo: A ausência de aglutinação das células vermelhas teste constitui um resultado
negativo e, dentro das limitações aceitas do procedimento, indicam a ausência do antígeno Rh apropriado nas
células a testar.
3. Os resultados dos testes, cujo controle negativo forneceu aglutinação, devem ser excluídos,
pois a aglutinação deve ser provavelmente causada pelo efeito do potencializador macromolecular do reagente.
Estabilidade das reações
1. Muito cuidado na interpretação dos resultados dos testes realizados em outras temperaturas
que não as recomendadas.
2. Ler todos os tubos e microplacas logo após a centrifugação.
3. Os testes de lâminas devem ser interpretados dentro de 2 minutos, para assegurar a
especificidade e evitar a possibilidade de um resultado negativo ser incorretamente interpretado como positivo, devido
ao ressecamento do reagente.
LIMITAÇÕES
1. Reagentes Anti-Rh não são adequados para o uso com células tratadas com enzimas, ou para
o uso em técnicas antiglobulinas.
2. Alguns anticorpos humanos monoclonais IgM anti-Rh possuem atividade de aglutininas frias
anti-I/I, particularmente com células do cordão ou células tratadas com enzimas. Isto pode ficar aparente se os testes
forem incubados a temperaturas abaixo da recomendada.
3. Algumas células vermelhas expressam variantes de antígenos Rh e podem fornecer reações
mais fracas que as encontradas com o controle positivo de células. Anti-C pode fornecer reações mais fracas com
antígeno C de indivíduos R2R2. Similarmente anti-e pode fornecer reações mais fracas na ausência do antígeno C, R2r,
r”r e rr.
4. A supressão ou expressão diminuída de certos antígenos de grupo sanguíneo pode aumentar
as reações falso-negativas, portanto cuidado deve ser tomado na determinação de genótipos baseados nestes
resultados.
5. Resultados falso-positivos ou falso-negativos podem ocorrer devido a:
Contaminação do material a testar
Concentração celular inadequada
Tempo de incubação ou temperatura inadequada
Centrifugação inadequada ou excessiva
Armazenamento inadequado dos materiais de teste
Desvio das técnicas recomendadas
CARACTERÍSTICAS DE DESEMPENHO ESPECIFICAS
1. O reagente foi caracterizado pelos procedimentos mencionados nas Técnicas
Recomendadas.
2. Antes de ser liberado, cada lote de Anti-C, Anti-E, Anti-c e Anti-e foi testado pelas Técnicas
Recomendadas contra um painel de células vermelhas antígeno-positivas para assegurar reatividade adequada.
3. A especificidade dos anticorpos monoclonais é demonstrada usando um painel de células
antígeno-negativas.
4. O Controle de Qualidade deste reagente foi realizado usando células vermelhas lavadas 2 vezes
com PBS ou Solução Fisiológica 0,9% antes do uso.
5. Os reagentes estão de acordo com recomendações do último artigo “Guidelines for the UK Blood
Transfusion Services”.
BIBLIOGRAFÍA
1. Kholer G, Milstein C. Continuous culure of fused cells secreting antibody of predefined specificity.
Nature 1975, 256, 495-497.
2. Race RR, Sanger R. Blood Groups in Man 6 th Edition, Oxford, Blackwell Scientific Publishers 1975,
Chapter 2.
3. Issitt PD. Applied Blood Group Serology, 3 rd Edition, Montgomery Scientific, Miami, 1985, Chapter 10.
4. Mollison PL. Blood Transfusion in Clinical Medicine, 8th Edition, Oxford, Blackwell Scientific
Publications, 1987, Chapter 7.
5. Tippett P. Sub-divisions of the Rh (D) antigen. Medical. Laboratory Science 1988; 45, 88-93
6. Thompson KM, Hughes-Jones NC. Production and characteristics of monoclonal anti-Rh. Bailliere’s
Clinical Haematology 1990; April
7. Jones J, Scott ML, Voak D. Monoclonal anti-D specificity and Rh D structure: criteria for selection of
monoclonal anti-D reagents for routine typing of patients and donors. Transfusion Medicine 1995. 5, 171184
8. Guidelines for the Blood Transfusion Service in the United Kingdom. H.M.S.O. Current Edition.
9. British Committee for Standards in Haematology, Blood Transfusion Task Force. Recommendations for
evaluation, validation and implementation of new techniques for blood grouping, antibody screening and
cross matching. Transfusion Medicine, 1995, 5, 145-150.
APRESENTAÇÃO
Monoclonal Anti-C
Ref: 1700031
5 ml
Monoclonal Anti-E
Ref: 1700033
5 ml
Monoclonal Anti-c
Ref: 1700035
5 ml
Monoclonal Anti-e
Ref: 1700037
5 ml
SPINREACT,S.A./S.A.U. Ctra.Santa Coloma, 7 E-17176 SANT ESTEVE DE BAS (GI) SPAIN
Tel. +34 972 69 08 00 Fax +34 972 69 00 99. e-mail: [email protected]
Anti-C, Anti-E, Anti-c, Anti-e MONOCLONAL
0843
Para técnicas em Tubo, Microplaca e Lâmina
Grupos sanguíneos
Determinação qualitativa de antígeno C, c, E, e em células vermelhas
IVD
Conservar a 2-8ºC
PRINCÍPIO DO MÉTODO
O reagente causa a aglutinação direta das células vermelhas teste que carregam o antígeno Rh
correspondente. A ausência de aglutinação geralmente indica a ausência do antígeno Rh correspondente
(ver LIMITAÇÕES).
SIGNIFICADO CLÍNICO
Levine e Stetson descobriram o grupo sanguíneo Rh em 1940. Além do antígeno D, os outros maiores
antígenos Rh são C, E, c, e. O antígeno D é altamente imunogênico; os antígenos C e e são menos
imunogênicos que E e c. Os anticorpos correspondentes são todos clinicamente significativos, pois
podem causar reações transfusionais e Doenças Hemolítica dos Recém-Nascido.
D
C
E
c
e
C. Técnica ID-Cartões DiaMed
1. Preparar uma suspensão de hemácias teste lavadas à 0,8% em ID-Diluent.
2. Retirar a cobertura de alumínio das colunas que serão utilizadas.
3. Pipetar na coluna apropriada: 50μl da suspensão de hemácias teste e 25μl do reagente Anti-Rh.
4. Centrifugar o ID-Cartão gel na ID-Centrífuga DiaMed.
5. Ler macroscopicamente a aglutinação.
85
70
30
80
98
D.
Antígenos Rh (freqüência na população caucasiana)
REAGENTES
Os reagentes de grupo sanguíneo IgM Anti-Rh Spinreact são reagentes de baixa proteína contendo
anticorpos monoclonais diluídos em cloreto de sódio 0,9%, contendo
albumina bovina 6% e
potencializadores macromoleculares. Cada reagente é fornecido em uma diluição ótima para ser usado
com todas as técnicas recomendadas, sem a necessidade de diluição ou adição posterior. O número de
referência do lote e a data de validade estão impressos nas etiquetas individuais dos frascos.
Reagente
Anti-C
Anti-E
Anti-c
Anti-e
Linha Celular /Clone
MS-24
MS-258
MS-33
MS-16 + MS-63
PRECAUÇÕES
1. O reagente é somente para uso em diagnóstico in vitro.
2. Se o frasco estiver rachado ou vazando, descartar o conteúdo imediatamente.
3. Não utilizar reagentes fora da data de vencimento (ver etiquetas).
4. Não utilizar os reagentes se houver presença de precipitados.
5. Durante a manipulação dos reagentes, deve-se utilizar equipamentos de proteção individual
(EPI),
como luvas descartáveis e aventais de proteção (jalecos)
6. O reagente foi esterilizado por filtração através de um filtro de 0.2 µm para reduzir
contaminação.
Uma vez que o frasco for aberto, o conteúdo permanece viável até a data de vencimento, desde que não
haja nenhuma turbidez que indique contaminação ou deterioração.
7. Este reagente possui azida sódica <0,1% e é classificado pelas Diretrizes aplicáveis da comunidade
Européia (CE) como nocivo (Xn).
8. Os materiais usados foram testados como negativos para HBsAg e anticorpos anti HIV1+2 e HCV com
técnicas microbiológicas aprovadas.
9. Nenhum teste pode garantir que produtos derivados de fontes animais ou humanas estejam livres de
agentes infecciosos, portanto, todo cuidado deve ser tomado no manuseio e descarte de cada frasco e
seu conteúdo.
NOTAS
1. Recomenda-se que sejam testados um Controle Positivo e um Controle Negativo em paralelo a cada
bateria de testes. O teste deve ser considerado inválido se os controles não demonstrarem os resultados
esperados.
2. Quando tipificar células vermelhas de um paciente é importante que um controle negativo seja incluído,
pois os potencializadores macromoleculares do reagente podem causar reações falso positivas com
células revestidas com IgG.
3. Os antígenos Rhesus fracos são pobremente detectados pela técnica de cartões de gel, placa e lâmina.
Recomenda-se o uso da técnica de tubos..
4. Nas Técnicas Recomendadas um volume corresponde a aproximadamente 40µl, quando usando o
conta-gotas fornecido com o frasco.
5. O uso dos reagentes e a interpretação dos resultados devem ser realizados por pessoal treinado e
qualificado, de acordo com os requerimentos do país onde o reagente está sendo usado.O usuário deve
determinar a adequação do reagente para o uso em outras técnicas.
CONSERVAÇÃO
Os frascos originais devem ser armazenados de 2-8ºC. Não congelar. O armazenamento prolongado a
temperaturas fora das especificações pode resultar em perda acelerada da reatividade.
MATERIAL NECESSÁRIO
Bastões aplicadores
Leitor de placas automático
Lâminas de vidro de microscopia
Tubos teste de vidro (10 x 75 mm ou 12 x 75 mm).
Agitador de placas
Tampão salina fosfato (PBS)-NaCl 0,9% pH 7,0 ± 0,2 à 22ºC ± 1ºC ou Solução Fisiológica
0,9%.
Controle de células vermelhas positivo e negativo
Tubos teste de centrífuga
Pipetas volumétricas
Centrífuga de microplacas
Microplacas “U” validadas
ID-Cartões DiaMed (Neutral).
ID-Centrífuga DiaMed.
ID-Diluente DiaMed (ID-CellStab).
AMOSTRAS
As amostras de sangue colhidas com ou sem anticoagulante. Se ocorrer algum atraso no teste, armazenar
as amostras a 2-8ºC. As amostras colhidas em EDTA ou citrato devem ser analisadas em 48 horas. As
amostras colhidas em ACD, CPD ou CPDA-1 podem ser testadas até 35 dias após a coleta. Todas as
amostras devem ser lavadas no mínimo duas vezes com tampão PBS ou Solução Fisiológica 0,9% antes
de serem testadas. Amostras com evidência de lise podem fornecer resultados não confiáveis.
TECNICAS RECOMENDADAS
A. Técnica em Tubo
1. Preparar uma suspensão das células vermelhas a testar à 2-3%, lavadas em PBS ou Solução
Fisiológica 0,9%.
2. Colocar em um tubo etiquetado: 1 volume de Reagente anti-Rh Spinreact e 1 volume da
suspensão de
células vermelhas a testar.
3. Misturar totalmente e centrifugar todos os tubos por 20 segundos a 1000 rcf ou por tempo e
força
alternativos adequados..
4. Ressuspender a base de células vermelhas suavemente e ler a aglutinação
macroscopicamente.
5. Qualquer tubo apresentando um resultado negativo ou questionável, deve ser incubado por 15
minutos
a temperatura ambiente.
6. Após a incubação repetir os passos 3 e 4.
GSIS10-P
B. Técnica em Lâmina
1. Preparar uma suspensão de células vermelhas a testar a 35-45% em PBS ou Solução
Fisiológica 0,9%.
2. Colocar em uma lâmina de vidro marcada: 1 volume de suspensão de células vermelhas a
estar e 1 volume de Reagente Anti-Rh Spinreact
3. Usando um bastão aplicador limpo, misturar os reagentes em uma área de cerca de 20x40mm.
4. Inclinar vagarosamente a lâmina por 30 segundos com agitações posteriores ocasionais
durante um período de 2 minutos mantendo a temperatura ambiente.
5. Ler macroscopicamente após 2 minutos em uma luz difusa e não confundir a presença de
fibrina com aglutinação.
6. Qualquer reação fraca deve ser repetida pela técnica do tubo.
26/02/13
Técnica em Microplaca Usando Cavidades em “U”
1. Preparar uma suspensão de células vermelhas a testar a 2-3% lavadas em PBS ou Solução
Fisiológica 0,9%.
2. Colocar na cavidade adequada: 1 volume de suspensão de células vermelhas a testar e 1
volume de Reagente Anti-Rh Spinreact
3. Misturar totalmente, preferivelmente com um agitador de microplacas, tomando cuidado para
evitar a contaminação cruzada de cavidades.
4. Incubar a temperatura ambiente por 15 minutos.
5. Centrifugar a microplaca por 1 minuto a 140rcf ou por tempo e força alternativos adequados.
6. Ressuspender suavemente a base de células vermelhas usando agitação controlada em um
agitador de microplacas.
7. Ler a aglutinação macroscopicamente ou com um leitor validado.
8. Qualquer reação fraca deve ser repetida pela técnica do tubo.
INTERPRETAÇÃO DOS RESULTADOS
1. Positivo: A aglutinação das células vermelhas teste constitui um resultado positivo e, dentro
das limitações aceitas do procedimento, indicam a presença do antígeno Rh apropriado nas células a testar.
2. Negativo: A ausência de aglutinação das células vermelhas teste constitui um resultado
negativo e, dentro das limitações aceitas do procedimento, indicam a ausência do antígeno Rh apropriado nas
células a testar.
3. Os resultados dos testes, cujo controle negativo forneceu aglutinação, devem ser excluídos,
pois a aglutinação deve ser provavelmente causada pelo efeito do potencializador macromolecular do reagente.
Estabilidade das reações
1. Muito cuidado na interpretação dos resultados dos testes realizados em outras temperaturas
que não as recomendadas.
2. Ler todos os tubos e microplacas logo após a centrifugação.
3. Os testes de lâminas devem ser interpretados dentro de 2 minutos, para assegurar a
especificidade e evitar a possibilidade de um resultado negativo ser incorretamente interpretado como positivo, devido
ao ressecamento do reagente.
LIMITAÇÕES
1. Reagentes Anti-Rh não são adequados para o uso com células tratadas com enzimas, ou para
o uso em técnicas antiglobulinas.
2. Alguns anticorpos humanos monoclonais IgM anti-Rh possuem atividade de aglutininas frias
anti-I/I, particularmente com células do cordão ou células tratadas com enzimas. Isto pode ficar aparente se os testes
forem incubados a temperaturas abaixo da recomendada.
3. Algumas células vermelhas expressam variantes de antígenos Rh e podem fornecer reações
mais fracas que as encontradas com o controle positivo de células. Anti-C pode fornecer reações mais fracas com
antígeno C de indivíduos R2R2. Similarmente anti-e pode fornecer reações mais fracas na ausência do antígeno C, R2r,
r”r e rr.
4. A supressão ou expressão diminuída de certos antígenos de grupo sanguíneo pode aumentar
as reações falso-negativas, portanto cuidado deve ser tomado na determinação de genótipos baseados nestes
resultados.
5. Resultados falso-positivos ou falso-negativos podem ocorrer devido a:
Contaminação do material a testar
Concentração celular inadequada
Tempo de incubação ou temperatura inadequada
Centrifugação inadequada ou excessiva
Armazenamento inadequado dos materiais de teste
Desvio das técnicas recomendadas
CARACTERÍSTICAS DE DESEMPENHO ESPECIFICAS
1. O reagente foi caracterizado pelos procedimentos mencionados nas Técnicas
Recomendadas.
2. Antes de ser liberado, cada lote de Anti-C, Anti-E, Anti-c e Anti-e foi testado pelas Técnicas
Recomendadas contra um painel de células vermelhas antígeno-positivas para assegurar reatividade adequada.
3. A especificidade dos anticorpos monoclonais é demonstrada usando um painel de células
antígeno-negativas.
4. O Controle de Qualidade deste reagente foi realizado usando células vermelhas lavadas 2 vezes
com PBS ou Solução Fisiológica 0,9% antes do uso.
5. Os reagentes estão de acordo com recomendações do último artigo “Guidelines for the UK Blood
Transfusion Services”.
BIBLIOGRAFÍA
1. Kholer G, Milstein C. Continuous culure of fused cells secreting antibody of predefined specificity.
Nature 1975, 256, 495-497.
2. Race RR, Sanger R. Blood Groups in Man 6 th Edition, Oxford, Blackwell Scientific Publishers 1975,
Chapter 2.
3. Issitt PD. Applied Blood Group Serology, 3 rd Edition, Montgomery Scientific, Miami, 1985, Chapter 10.
4. Mollison PL. Blood Transfusion in Clinical Medicine, 8th Edition, Oxford, Blackwell Scientific
Publications, 1987, Chapter 7.
5. Tippett P. Sub-divisions of the Rh (D) antigen. Medical. Laboratory Science 1988; 45, 88-93
6. Thompson KM, Hughes-Jones NC. Production and characteristics of monoclonal anti-Rh. Bailliere’s
Clinical Haematology 1990; April
7. Jones J, Scott ML, Voak D. Monoclonal anti-D specificity and Rh D structure: criteria for selection of
monoclonal anti-D reagents for routine typing of patients and donors. Transfusion Medicine 1995. 5, 171184
8. Guidelines for the Blood Transfusion Service in the United Kingdom. H.M.S.O. Current Edition.
9. British Committee for Standards in Haematology, Blood Transfusion Task Force. Recommendations for
evaluation, validation and implementation of new techniques for blood grouping, antibody screening and
cross matching. Transfusion Medicine, 1995, 5, 145-150.
APRESENTAÇÃO
Monoclonal Anti-C
Ref: 1700031
5 ml
Monoclonal Anti-E
Ref: 1700033
5 ml
Monoclonal Anti-c
Ref: 1700035
5 ml
Monoclonal Anti-e
Ref: 1700037
5 ml
SPINREACT,S.A./S.A.U. Ctra.Santa Coloma, 7 E-17176 SANT ESTEVE DE BAS (GI) SPAIN
Tel. +34 972 69 08 00 Fax +34 972 69 00 99. e-mail: [email protected]
MONOCLONAL Anti-C, Anti-E, Anti-c,Anti-e
0843
Qualitative test for determination of the C,c,E,e antigen on human red blood cells.
IVD
Store at 2-8ºC
CLINICAL SIGNIFICANCE
Levine and Stetson discovered the Rh blood group system in 1940. Apart from D the other major Rh
antigens are C, E, c and e. The D antigen is highly immunogenic; the C and e antigens are less
immunogenic than E and c. The corresponding antibodies are all clinically significant since they may
cause both Transfusion Reactions and Haemolytic Disease of the Newborn.
Reagent
Cell Line / Clone
Anti-C
MS-24
Anti-E
MS-258
Anti-c
MS-33
Anti-e
MS-16 + MS-63
Table 2: Human IgM Cell Lines / Clones used.
PRECAUTIONS
1. The reagents are intended for in vitro diagnostic use only.
2. If a reagent vial is cracked or leaking, discard the contents immediately.
3. Do not use the reagents past the expiration date (see Vial Label).
4. Do not use the reagents if a precipitate is present.
5. Protective clothing should be worn when handling the reagents, such as disposable gloves and a
laboratory coat.
6. The reagents have been filtered through a 0.2 µm capsule to reduce the bio-burden. Once a vial
has been opened the contents should remain viable up until the expiry date as long as there is no
marked turbidity, which can indicate reagent deterioration or contamination.
7. The reagents contain < 0.1% sodium azide. Sodium azide may be toxic if ingested and may react
with lead and copper plumbing to form explosive metal azides. On disposal flush away with large
volumes of water.
8. Materials used to produce the products were tested at source and found to be negative for HIV
1+2 and HCV antibodies and HBsAg using approved microbiological tests.
9. No known tests can guarantee that products derived from human or animal sources are free from
infectious agents. Care must be taken in the use and disposal of each vial and its contents.
10. For information on disposal of the reagent and decontamination of a spillage site see Material
Safety Data Sheets, available on request.
NOTES
1. It is recommended a positive control (ideally heterozygous) and a negative control be
tested in parallel with each batch of tests. Tests must be considered invalid if controls do not
show expected results.
2. When typing red cells from a patient it is important that a reagent negative control is
included since the macromolecular potentiators in the reagent may cause false positive
reactions with IgG coated cells.
3. Weak Rhesus antigens may be poorly detected by the gel card, microtitre plate and slide
technique. It is recommended that weak Rhesus antigens are tested using the tube test
technique.
4. In the techniques here detailed one volume is approximately 40µl when using the vial
dropper provided.
5. The use of reagents and interpretation of results must be carried out by properly trained
and qualified personnel in accordance with requirements of
the country where the reagents are in use.
6. The user must the determine suitability of the reagents for use in other techniques.
STORAGE
Do not freeze. Reagent vials should be stored at 2 - 8ºC on receipt. Prolonged storage at
temperatures outside this range may result in accelerated loss of reagent reactivity.
MATERIAL REQUIRED
Glass test tubes (10 x 75 mm or 12 x 75 mm).
Test tube centrifuge.
Volumetric pipettes.
Glass microscope slides.
Applicator sticks.
Phosphate Buffered Saline (PBS): NaCl 0.9%, pH 7.0 ± 0.2 at 22ºC ± 1ºC.
Positive (ideally R1r) and negative (rr) control red cells.
DiaMed ID-Cards (Neutral).
DiaMed ID-Centrifuge.
DiaMed ID-Diluent: e.g. ID-CellStab.
Plate shaker.
Automatic plate reader.
Validated “U” well microplates.
Microplate centrifuge.
SAMPLE
Blood samples drawn with or without anticoagulant may be used for antigen typing. If testing is
delayed then store specimens at 2-8ºC. EDTA and citrate samples should be typed within 48
hours. Samples collected into ACD, CPD or CPDA-1 may be tested up to 35 days from the
date of withdrawal. All blood samples should be washed at least twice with PBS before being
tested. Blood samples showing evidence of lysis may give unreliable results.
PROCEDURE
A. Tube Method
1. Prepare a 2-3% suspension of washed test red cells in PBS.
2. Place in a labelled test tube: 1 volume Anti-Rh reagent and 1 volume test red cell
suspension.
3. Mix thoroughly and centrifuge all tubes for 20 seconds at 1000 rcf or for a suitable
alternative time and force.
4. Gently resuspend red cell button and read macroscopically for agglutination
Ed.2005
Slide Method
1. Prepare a 35-45% suspension of test red cells in serum, plasma or PBS.
2. Place on a labelled glass slide: 1 volume of Anti-Rh reagent and 1 volume of test red cell
suspension.
3. Using a clean applicator stick, mix reagent and cells over an area of about 20 x 40 mm.
4. Slowly tilt the slide back and forth for 30 seconds, with occasional further mixing during the
2-minute period, maintaining slide at room temperature.
5. Read macroscopically after 2 minutes over a diffuse light and do not mistake fibrin strands
as agglutination.
6. Any weak reactions should be repeated by the tube technique.
DiaMed-ID Micro Typing Technique
1. Prepare a 0.8% suspension of washed test red cells in an ID-Diluent.
2. Remove aluminium foil from as many microtubes as needed.
3. Place in appropriate microtube: 50µl of test red cell suspension and 25µl of Anti-Rh
reagent.
4. Centrifuge the ID-Card(s) for 10 minutes at 90 rcf or for a suitable alternative time and
force.
5. Read macroscopically for agglutination.
C.
e
98
REAGENTS
Spinreact Monoclonal IgM Anti-Rh blood grouping reagents are low protein reagents
containing human monoclonal antibodies diluted with sodium chloride (0.9 g%), bovine albumin
(6 g%) and macromolecular potentiators. Each reagent is supplied at optimal dilution for use
with all recommended techniques stated below without need for further dilution or addition. For
lot reference number and expiry date see Vial Label.
GSIS10-I
5. Any tubes, which show a negative or questionable result, should be incubated for 15
minutes at room temperature.
6. Following incubation, repeat steps 3 and 4.
B.
PRINCIPLE OF THE METHOD
The reagents will cause direct agglutination (clumping) of test red cells that carry the
corresponding Rh antigen. No agglutination generally indicates the absence of the
corresponding Rh antigen (see Limitations).
Major Rh Antigens
D
C
E
c
85
70
30
80
Table 1: Frequency of each antigen in Caucasian population.
Tube, Slide, Diamed-ID and Microplate Tests
Blood Grouping
Microplate Technique, using “U” wells
1. Prepare a 2-3% suspension of washed test red cells in PBS.
2. Place in the appropriate well: 1 volume Anti-Rh reagent and 1 volume test red cell
suspension.
3. Mix thoroughly, preferably using a microplate shaker, taking care to avoid cross-well
contamination.
4. Incubate at room temperature for 15 minutes (time dependant on user).
5. Centrifuge the microplate for 1 minute at 140 rcf or for a suitable alternative time and
force.
6. Resuspend the cell buttons using carefully controlled agitation on a microplate shaker
7. Read macroscopically or with a validated automatic reader.
8. Any weak reactions should be repeated by the tube technique.
D.
INTERPRETATION OF TEST RESULTS
1. Positive: Agglutination of the test red cells constitutes a positive test result and within
accepted limitations of test procedure, indicates the presence of the appropriate Rh antigen on
the test red cells.
2. Negative: No agglutination of the test red cells constitutes a negative result and within the
accepted limitations of the test procedure, indicates the absence of the appropriate Rh antigen
on the test red cells.
3. Test results of cells that are agglutinated using the reagent negative control shall be
excluded, as the agglutination is most probably caused by the effect of the macromolecular
potentiators in the reagent on sensitised cells.
Stability of the reactions
1. Read all tube and microplate tests straight after centrifugation.
2. Slide tests should be interpreted within two minutes to ensure specificity and to avoid the
possibility a negative result may be incorrectly interpreted as positive due to drying of the
reagent.
3. Caution should be exercised in the interpretation of results of tests performed at
temperatures other than those recommended.
LIMITATIONS
1. Spinreact Anti-Rh reagents are not suitable for use with enzyme treated cells or for use in indirect
antiglobulin techniques.
2. Some red cells express variant Rh antigens and may give weaker reactions than seen with
randomly selected positive control cells. Anti-C may give weaker reactions with C antigen of R 2RZ
individuals. Similarly, Anti-e may give slightly weaker reactions in absence of C antigen, e.g. R 2r, r”r and
rr.
3. Suppressed or diminished expression of certain blood group antigens may conversely give rise to
false negative reactions. For these reasons, caution should always be exercised when assigning
genotypes on the basis of test results.
4. False positive or false negative results may also occur due to:
Contamination of test materials
Improper storage, cell concentration, incubation time or temperature
Improper or excessive centrifugation
Deviation from the recommended techniques
5. The user is responsible for the performance of the reagents by any method other than those
mentioned in the Recommended Techniques.
6. Any deviations from the Recommended Techniques should be validated prior to use 9.
PERFORMANCE CHARACTERISTICS
1. The reagents have been characterised by all the procedures here mentioned.
2. Prior to release, each lot of Spinreact Monoclonal Anti-C, Anti-E, Anti-c, Anti-e, AntiC+D+E and Anti-C+D is tested by the Recommended Techniques against a panel of antigenpositive red cells to ensure suitable reactivity.
3. Specificity of source monoclonal antibodies is demonstrated using a panel of antigennegative cells.
4. The Quality Control of the reagents was performed using red cells that had been washed
twice with PBS prior to use.
5. The reagents comply with the recommendations contained in the latest issue of the
Guidelines for the UK Blood Transfusion Services.
BIBLIOGRAPHY
1. Kholer G, Milstein C. Continuous culture of fused cells secreting antibody of predefined specificity. Nature
1975, 256, 495-497.
2. Race RR, Sanger R. Blood Groups in Man 6 th Edition, Oxford, Blackwell Scientific Publishers 1975, Chapter 2.
3. Issitt PD. Applied Blood Group Serology, 3 rd Edition, Montgomery Scientific, Miami, 1985, Chapter 10.
4. Mollison PL. Blood Transfusion in Clinical Medicine, 8 th Edition, Oxford, Blackwell Scientific Publications, 1987,
Chapter 7.
5. Tippett P. Sub-divisions of the Rh (D) antigen. Medical. Laboratory Science 1988; 45, 88-93
6. Thompson KM, Hughes-Jones NC. Production and characteristics of monoclonal anti-Rh. Bailliere’s Clinical
Haematology 1990; April
7. Jones J, Scott ML, Voak D. Monoclonal anti-D specificity and Rh D structure: criteria for selection of
monoclonal anti-D reagents for routine typing of patients and donors. Transfusion Medicine 1995. 5, 171-184
8. Guidelines for the Blood Transfusion Service in the United Kingdom. H.M.S.O. Current Edition.
9. British Committee for Standards in Haematology, Blood Transfusion Task Force. Recommendations for
evaluation, validation and implementation of new techniques for blood grouping, antibody screening and cross
matching. Transfusion Medicine, 1995, 5, 145-150.
PACKAGING
Monoclonal Anti-C
Monoclonal Anti-E
Monoclonal Anti-c
Monoclonal Anti-e
Ref: 1700031
Ref: 1700033
Ref: 1700035
Ref: 1700037
5 ml
5 ml
5 ml
5 ml
SPINREACT,S.A. Ctra.Santa Coloma, 7 E-17176 SANT ESTEVE DE BAS (GI) SPAIN
Tel. +34 972 69 08 00 Fax +34 972 69 00 99. e-mail: [email protected]
MONOCLONAL Anti-C, Anti-E, Anti-c,Anti-e
0843
Qualitative test for determination of the C,c,E,e antigen on human red blood cells.
IVD
Store at 2-8ºC
CLINICAL SIGNIFICANCE
Levine and Stetson discovered the Rh blood group system in 1940. Apart from D the other major Rh
antigens are C, E, c and e. The D antigen is highly immunogenic; the C and e antigens are less
immunogenic than E and c. The corresponding antibodies are all clinically significant since they may
cause both Transfusion Reactions and Haemolytic Disease of the Newborn.
Reagent
Cell Line / Clone
Anti-C
MS-24
Anti-E
MS-258
Anti-c
MS-33
Anti-e
MS-16 + MS-63
Table 2: Human IgM Cell Lines / Clones used.
PRECAUTIONS
1. The reagents are intended for in vitro diagnostic use only.
2. If a reagent vial is cracked or leaking, discard the contents immediately.
3. Do not use the reagents past the expiration date (see Vial Label).
4. Do not use the reagents if a precipitate is present.
5. Protective clothing should be worn when handling the reagents, such as disposable gloves and a
laboratory coat.
6. The reagents have been filtered through a 0.2 µm capsule to reduce the bio-burden. Once a vial
has been opened the contents should remain viable up until the expiry date as long as there is no
marked turbidity, which can indicate reagent deterioration or contamination.
7. The reagents contain < 0.1% sodium azide. Sodium azide may be toxic if ingested and may react
with lead and copper plumbing to form explosive metal azides. On disposal flush away with large
volumes of water.
8. Materials used to produce the products were tested at source and found to be negative for HIV
1+2 and HCV antibodies and HBsAg using approved microbiological tests.
9. No known tests can guarantee that products derived from human or animal sources are free from
infectious agents. Care must be taken in the use and disposal of each vial and its contents.
10. For information on disposal of the reagent and decontamination of a spillage site see Material
Safety Data Sheets, available on request.
NOTES
1. It is recommended a positive control (ideally heterozygous) and a negative control be
tested in parallel with each batch of tests. Tests must be considered invalid if controls do not
show expected results.
2. When typing red cells from a patient it is important that a reagent negative control is
included since the macromolecular potentiators in the reagent may cause false positive
reactions with IgG coated cells.
3. Weak Rhesus antigens may be poorly detected by the gel card, microtitre plate and slide
technique. It is recommended that weak Rhesus antigens are tested using the tube test
technique.
4. In the techniques here detailed one volume is approximately 40µl when using the vial
dropper provided.
5. The use of reagents and interpretation of results must be carried out by properly trained
and qualified personnel in accordance with requirements of
the country where the reagents are in use.
6. The user must the determine suitability of the reagents for use in other techniques.
STORAGE
Do not freeze. Reagent vials should be stored at 2 - 8ºC on receipt. Prolonged storage at
temperatures outside this range may result in accelerated loss of reagent reactivity.
MATERIAL REQUIRED
Glass test tubes (10 x 75 mm or 12 x 75 mm).
Test tube centrifuge.
Volumetric pipettes.
Glass microscope slides.
Applicator sticks.
Phosphate Buffered Saline (PBS): NaCl 0.9%, pH 7.0 ± 0.2 at 22ºC ± 1ºC.
Positive (ideally R1r) and negative (rr) control red cells.
DiaMed ID-Cards (Neutral).
DiaMed ID-Centrifuge.
DiaMed ID-Diluent: e.g. ID-CellStab.
Plate shaker.
Automatic plate reader.
Validated “U” well microplates.
Microplate centrifuge.
SAMPLE
Blood samples drawn with or without anticoagulant may be used for antigen typing. If testing is
delayed then store specimens at 2-8ºC. EDTA and citrate samples should be typed within 48
hours. Samples collected into ACD, CPD or CPDA-1 may be tested up to 35 days from the
date of withdrawal. All blood samples should be washed at least twice with PBS before being
tested. Blood samples showing evidence of lysis may give unreliable results.
PROCEDURE
A. Tube Method
1. Prepare a 2-3% suspension of washed test red cells in PBS.
2. Place in a labelled test tube: 1 volume Anti-Rh reagent and 1 volume test red cell
suspension.
3. Mix thoroughly and centrifuge all tubes for 20 seconds at 1000 rcf or for a suitable
alternative time and force.
4. Gently resuspend red cell button and read macroscopically for agglutination
Ed.2005
Slide Method
1. Prepare a 35-45% suspension of test red cells in serum, plasma or PBS.
2. Place on a labelled glass slide: 1 volume of Anti-Rh reagent and 1 volume of test red cell
suspension.
3. Using a clean applicator stick, mix reagent and cells over an area of about 20 x 40 mm.
4. Slowly tilt the slide back and forth for 30 seconds, with occasional further mixing during the
2-minute period, maintaining slide at room temperature.
5. Read macroscopically after 2 minutes over a diffuse light and do not mistake fibrin strands
as agglutination.
6. Any weak reactions should be repeated by the tube technique.
DiaMed-ID Micro Typing Technique
1. Prepare a 0.8% suspension of washed test red cells in an ID-Diluent.
2. Remove aluminium foil from as many microtubes as needed.
3. Place in appropriate microtube: 50µl of test red cell suspension and 25µl of Anti-Rh
reagent.
4. Centrifuge the ID-Card(s) for 10 minutes at 90 rcf or for a suitable alternative time and
force.
5. Read macroscopically for agglutination.
C.
e
98
REAGENTS
Spinreact Monoclonal IgM Anti-Rh blood grouping reagents are low protein reagents
containing human monoclonal antibodies diluted with sodium chloride (0.9 g%), bovine albumin
(6 g%) and macromolecular potentiators. Each reagent is supplied at optimal dilution for use
with all recommended techniques stated below without need for further dilution or addition. For
lot reference number and expiry date see Vial Label.
GSIS10-I
5. Any tubes, which show a negative or questionable result, should be incubated for 15
minutes at room temperature.
6. Following incubation, repeat steps 3 and 4.
B.
PRINCIPLE OF THE METHOD
The reagents will cause direct agglutination (clumping) of test red cells that carry the
corresponding Rh antigen. No agglutination generally indicates the absence of the
corresponding Rh antigen (see Limitations).
Major Rh Antigens
D
C
E
c
85
70
30
80
Table 1: Frequency of each antigen in Caucasian population.
Tube, Slide, Diamed-ID and Microplate Tests
Blood Grouping
Microplate Technique, using “U” wells
1. Prepare a 2-3% suspension of washed test red cells in PBS.
2. Place in the appropriate well: 1 volume Anti-Rh reagent and 1 volume test red cell
suspension.
3. Mix thoroughly, preferably using a microplate shaker, taking care to avoid cross-well
contamination.
4. Incubate at room temperature for 15 minutes (time dependant on user).
5. Centrifuge the microplate for 1 minute at 140 rcf or for a suitable alternative time and
force.
6. Resuspend the cell buttons using carefully controlled agitation on a microplate shaker
7. Read macroscopically or with a validated automatic reader.
8. Any weak reactions should be repeated by the tube technique.
D.
INTERPRETATION OF TEST RESULTS
1. Positive: Agglutination of the test red cells constitutes a positive test result and within
accepted limitations of test procedure, indicates the presence of the appropriate Rh antigen on
the test red cells.
2. Negative: No agglutination of the test red cells constitutes a negative result and within the
accepted limitations of the test procedure, indicates the absence of the appropriate Rh antigen
on the test red cells.
3. Test results of cells that are agglutinated using the reagent negative control shall be
excluded, as the agglutination is most probably caused by the effect of the macromolecular
potentiators in the reagent on sensitised cells.
Stability of the reactions
1. Read all tube and microplate tests straight after centrifugation.
2. Slide tests should be interpreted within two minutes to ensure specificity and to avoid the
possibility a negative result may be incorrectly interpreted as positive due to drying of the
reagent.
3. Caution should be exercised in the interpretation of results of tests performed at
temperatures other than those recommended.
LIMITATIONS
1. Spinreact Anti-Rh reagents are not suitable for use with enzyme treated cells or for use in indirect
antiglobulin techniques.
2. Some red cells express variant Rh antigens and may give weaker reactions than seen with
randomly selected positive control cells. Anti-C may give weaker reactions with C antigen of R 2RZ
individuals. Similarly, Anti-e may give slightly weaker reactions in absence of C antigen, e.g. R 2r, r”r and
rr.
3. Suppressed or diminished expression of certain blood group antigens may conversely give rise to
false negative reactions. For these reasons, caution should always be exercised when assigning
genotypes on the basis of test results.
4. False positive or false negative results may also occur due to:
Contamination of test materials
Improper storage, cell concentration, incubation time or temperature
Improper or excessive centrifugation
Deviation from the recommended techniques
5. The user is responsible for the performance of the reagents by any method other than those
mentioned in the Recommended Techniques.
6. Any deviations from the Recommended Techniques should be validated prior to use 9.
PERFORMANCE CHARACTERISTICS
1. The reagents have been characterised by all the procedures here mentioned.
2. Prior to release, each lot of Spinreact Monoclonal Anti-C, Anti-E, Anti-c, Anti-e, AntiC+D+E and Anti-C+D is tested by the Recommended Techniques against a panel of antigenpositive red cells to ensure suitable reactivity.
3. Specificity of source monoclonal antibodies is demonstrated using a panel of antigennegative cells.
4. The Quality Control of the reagents was performed using red cells that had been washed
twice with PBS prior to use.
5. The reagents comply with the recommendations contained in the latest issue of the
Guidelines for the UK Blood Transfusion Services.
BIBLIOGRAPHY
1. Kholer G, Milstein C. Continuous culture of fused cells secreting antibody of predefined specificity. Nature
1975, 256, 495-497.
2. Race RR, Sanger R. Blood Groups in Man 6 th Edition, Oxford, Blackwell Scientific Publishers 1975, Chapter 2.
3. Issitt PD. Applied Blood Group Serology, 3 rd Edition, Montgomery Scientific, Miami, 1985, Chapter 10.
4. Mollison PL. Blood Transfusion in Clinical Medicine, 8 th Edition, Oxford, Blackwell Scientific Publications, 1987,
Chapter 7.
5. Tippett P. Sub-divisions of the Rh (D) antigen. Medical. Laboratory Science 1988; 45, 88-93
6. Thompson KM, Hughes-Jones NC. Production and characteristics of monoclonal anti-Rh. Bailliere’s Clinical
Haematology 1990; April
7. Jones J, Scott ML, Voak D. Monoclonal anti-D specificity and Rh D structure: criteria for selection of
monoclonal anti-D reagents for routine typing of patients and donors. Transfusion Medicine 1995. 5, 171-184
8. Guidelines for the Blood Transfusion Service in the United Kingdom. H.M.S.O. Current Edition.
9. British Committee for Standards in Haematology, Blood Transfusion Task Force. Recommendations for
evaluation, validation and implementation of new techniques for blood grouping, antibody screening and cross
matching. Transfusion Medicine, 1995, 5, 145-150.
PACKAGING
Monoclonal Anti-C
Monoclonal Anti-E
Monoclonal Anti-c
Monoclonal Anti-e
Ref: 1700031
Ref: 1700033
Ref: 1700035
Ref: 1700037
5 ml
5 ml
5 ml
5 ml
SPINREACT,S.A. Ctra.Santa Coloma, 7 E-17176 SANT ESTEVE DE BAS (GI) SPAIN
Tel. +34 972 69 08 00 Fax +34 972 69 00 99. e-mail: [email protected]