COLORANTES PARA TINCIÓN GRAM STAINS FOR GRAM STAIN

COLORANTES PARA TINCIÓN GRAM
STAINS FOR GRAM STAIN
Para diagnóstico “in vitro”
For “in vitro” diagnostic
Principio
La tinción de Gram permite diferenciar los microorganismos en dos grandes
grupos, los que retienen el colorante primario (Gram positivos) y los que lo
pierden debido a la estructura de su pared celular y se tiñen con el colorante de contraste (Gram negativos).
El procedimiento requiere cuatro reactivos: un colorante primario, disolución de yodo-yoduro, un decolorante y un colorante de contaste.
Reactivos
Colorantes primarios
a) Violeta Cristal
Composición
Colorante Violeta cristal
Etanol
b) Violeta de Genciana Fenicada.
Composición
Colorante Violeta de genciana
Etanol
Fenol
Disolución de Yodo Lugol
Composición
Yodo
Yoduro potásico
Decolorante Gram
Composición
Isopropanol
Acetona
Colorantes de contraste
a) Safranina
Composición
Safranina
Etanol
b) Fucsina Gram:
Composición
Fucsina básica
Muestras
Extensiones procedentes de cultivos bacterianos. Muestras procedentes
de diversos fluidos corporales: exudados, fluidos pulmonares, sedimentos
de orina etc.
Manipular las muestras con precaución por su capacidad potencialmente
infecciosa.
Principle
The Gram stain procedure differentiates microorganisms into two groups,
those which retain the primary dye (Gram-positive) and those which lose the
primary dye, due to the structure of cellular wall, and take the colour of the
counterstain (Gram negatives).
Samples
Smears of microorganisms from bacterial cultures. Samples from body
fluids as: exudates, pulmonary fluid, urine, etc.
The samples must be handled with care due to its capacity of infection.
The procedure needs four reagents: Primary dye, Iodine solution, Decolorizer and Counter stain.
Procedure
Técnica
1 x 500ml
1 x 1000 ml
1 x 5000 ml
6 x 250 ml
Preparar una extensión y fijar a la llama suavemente.
Ref. 99 52 02
Ref. 99 45 00
Ref. 99 98 02
Ref. 99 99 13
1.
2.
3.
0,40 %
15 %
1 x 500 ml
1 x 1000 ml
1 x 5000 ml
4.
5.
Ref. 99 79 28
Ref. 99 79 41
Ref. 99 65 57
6.
7.
8.
0,45 %
13%
1%
1 x 500 ml
1 x 1000 ml
Cubrir la extensión con el colorante primario. Dejar reposar
durante 1 minuto.
Lavar con agua corriente. Sacar el exceso de agua.
Cubrir con la disolución de Yodo y dejar en contacto 1
minuto.
Decantar y lavar con agua corriente.
Decolorar con el Decolorante hasta que se deje de producir
color violeta.
Lavar con agua.
Teñir con el colorante de contraste durante 1 minuto.
Lavar con agua y secar al aire.
Observar con objetivo de inmersión.
Resultados
Bacterias Gram-positivas: violeta oscuro.
Bacterias Gram-negativas: rojo-anaranjado.
Ref. 99 30 85
Ref. 99 88 42
0,4 %
0,8 %
1 x 1000 ml
1 x 5000 ml
6 x 250 ml
Ref. 99 04 89
Ref. 99 11 10
Ref. 99 76 70
70 %
30 %
1 x 500 ml
1 x 1000 ml
1 x 5000 ml
6 x 250 ml
Ref. 99 99 21
Ref. 99 87 15
Ref. 99 65 01
Ref. 99 98 04
0,4 %
20 %
1 x 1000 ml
6 x 250 ml
Notas al método
La técnica descrita anteriormente puede modificarse de acuerdo con las
preferencias del operador para lograr mayor o menor intensidad de coloración, lo cual implica variaciones en los tiempos de tinción, decoloración,
lavado, … etc.
Cultivos y preparaciones viejas pueden dar resultados atípicos. Es por ello
que se recomienda utilizar cultivos de 18-24 h como máximo y extensiones
recientes.
Asimismo, es importante controlar la fijación por el calor (dos-tres pasos
de un segundo por llama suave); un exceso del mismo puede dar coloraciones erróneas.
Si se usa agua corriente para el lavado tener presente que aguas intensamente cloradas pueden debilitar la coloración de contraste.
Bibliografía
Clarck, G. (1981) “Staining Procedures”, 4th ed., Williams & Willkins.
Bartholomew, J. M., Mittwer, T. (1952), Bacteriol. Rev., 16, 1-29.
Ref. 99 72 17
Ref. 99 04 37
0,02 %
Reagents
Primary dyes
a) Crystal Violet
Composition
Crystal Violet
Ethanol
b) Carbol Gentian Violet
Composition
Gentian Violet
Ethanol
Phenol
Iodine solution (Lugol)
Composition
Iodine
Potassium Iodide
Gram Decolorizer
Composition
Isopropyl Alcohol
Acetone
Counter stains
a) Safranin
Composition
Safranin
Ehanol
b) Gram Fuchsin:
Composition
Basic Fuchsin
Prepare a smear and heat-fix it by gentle heating in the flame
1 x 500ml
1 x 1000 ml
1 x 5000 ml
6 x 250 ml
Ref. 99 52 02
Ref. 99 45 00
Ref. 99 98 02
Ref. 99 99 13
3.
4.
5.
0.40 %
15 %
1 x 500 ml
1 x 1000 ml
1 x 5000 ml
6.
7.
8.
Ref. 99 79 28
Ref. 99 79 41
Ref. 99 65 57
1 x 500 ml
1 x 1000 ml..
Results
Gram-positive bacteria: dark violet.
Gram-negative bacteria: orange – red.dsgfsdfg
Ref. 99 30 85
Ref. 99 88 42
0.4 %
0.8 %
1 x 1000 ml
1 x 5000 ml
6 x 250 ml
Ref. 99 04 89
Ref. 99 11 10
Ref. 99 76 70
70 %
30 %
1 x 500 ml
1 x 1000 ml
1 x 5000 ml
6 x 250 ml
Ref. 99 99 21
Ref. 99 87 15
Ref. 99 65 01
Ref. 99 98 04
Notes
The procedure described above can be modified according to the user’s
preferences to achieve a weaker or stronger colour intensity, being carried
out by changing the times for staining, washing,... etc.
Old cultures or smears could give atypical results. That is why cultures of
18-24 hours or recent smears are recommended.
It is important to control the heat fixation procedure. Excess of heat can
change the results of coloration procedure.
Highly chlorinated tap water could weaken the counter staining.
References
Clarck, G. (1981) “Staining Procedures”, 4th ed., Williams & Willkins.
Bartholomew, J. M., Mittwer, T. (1952), Bacteriol. Rev., 16, 1-29.
0.4 %
20 %
1 x 1000 ml
6 x 250 ml
Cover the slide with primary dye. Let stand for 1 min.
Remove excess by rinsing briefly with running tap water.
Shake off excess water.
Cover with Iodine solution and let be in contact for 1 min.
Decant and rinse with running tap water.
Decolorize with the Gram Decolorizer until waste decolorizer
were colourless.
Rinse with running tap water.
Finally, post-stain with the Safranin solution for 2-3 min.
Rinse with running tap water and air dry.
Examine under an oil immersion objective.
0.45 %
13%
1%
Ref. 99 72 17
Ref. 99 04 37
0.02 %
Conservación y estabilidad
Almacenados a temperatura ambiente (15 - 25 º C), los reactivos son estables hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta.
Storage and stability
When stored at room temperature (15º - 25 ºC), reagents will remain stable
until the expiration date stated on the label.
Precaución
Los productos son para uso profesional. Todos los reactivos deben manipularse con precaución por personal técnico formado. Se aconseja consultar
antes de su uso la ficha de datos de seguridad.
El Decolorante Gram es irritante y fácilmente inflamable.
La eliminación de los residuos debe hacerse según la normativa legal vigente
Caution
Reagents for professional users. The stains have to be handled with care by
trained personal. It is advisable to refer to the MSDS before use.
The Gram Decolorizer is irritant and flammable.
Waste products must be handled as per local regulations
QUIMICA CLINICA APLICADA S.A.
Empresa Certificada ISO 9001 / ISO 13485
A 7 Km 1081 – P.O. Box 20 - E43870 AMPOSTA / SPAIN
Tel. ++ 34 (977) 70. 62. 30 Fax ++ 34 (977) 70. 30. 40
Revisión: Julio 2011
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ISO 9001 / ISO 13485 Certified Company
A 7 Km 1081 – P.O. Box 20 - E43870 AMPOSTA / SPAIN
Tel. ++ 34 (977) 70. 62. 30 Fax ++ 34 (977) 70. 30. 40
Revision: July 2011
PRO4_REG9_GRAM_5
1.
2.
PRO4_REG9_GRAM_5
CORANTES PARA COLORAÇÃO DE GRAM
COLORANTS POUR LA COLORATION GRAM
Para diagnóstico “in vitro”
Pour le diagnostic “in vitro”
Princípio
A coloração de Gram permite diferenciar os microrganismos em dois
grandes grupos: os que retêm o corante primário (Gram positivos) e os
que o perdem devido à estrutura da sua parede celular e coloram-se com o
corante de contraste (Gram negativos).
O procedimento requer quatro reagentes: um corante primário, solução de
iodo-iodeto, um descolorante e um corante de contraste.
Reagentes
Corantes primários
a) Violeta Cristal
Composição
Corante Violeta cristal
Etanol
b) Violeta de Genciana Fenicada
Composição
Corante Violeta de genciana
Etanol
Fenol
Solução de Iodo Lugol
Composição
Iodo
Iodeto de potássio
Descolorante Gram
Composição
Isopropanol
Acetona
Corantes de contraste
a) Safranina
Composição
Safranina
Etanol
b) Fucsina Gram:
Composição
Fucsina básica
Amostras
Esfregaços procedentes de culturas bacterianas. Amostras procedentes
de diversos fluidos corporais: exsudatos, fluidos pulmonares, urina etc.
Manipular as amostras com precaução pela sua capacidade potencialmente
infecciosa.
Técnica
1x
1x
1x
6x
500 ml
1000 ml
5000 ml
250 ml
Ref. 99 52 02
Ref. 99 45 00
Ref. 99 98 02
Ref. 99 99 13
Preparar um esfregaço e fixar à chama suavemente.
1.
2.
3.
4.
5.
0,40%
15%
1 x 500 ml
1 x 1000 ml
1 x 5000 ml
Ref. 99 79 28
Ref. 99 79 41
Ref. 99 65 57
6.
7.
8.
0,45%
13%
1%
1 x 500 ml
1 x 1000 ml
Observar com objectiva de imersão.
Ref. 99 04 89
Ref. 99 11 10
Ref. 99 76 70
70%
30%
1x
1x
1x
6x
500 ml
1000 ml
5000 ml
250 ml
Ref. 99 99 21
Ref. 99 87 15
Ref. 99 65 01
Ref. 99 98 04
0,4%
20%
1 x 1000 ml
6 x 250 ml
Resultados
Bactérias Gram-positivas: violeta escuro.
Bactérias Gram-negativas: vermelho-alaranjado.
Ref. 99 30 85
Ref. 99 88 42
0, 4%
0, 8%
1 x 1000 ml
1 x 5000 ml
6 x 250 ml
Cobrir o esfregaço com o corante primário. Deixar repousar
durante 1 minuto.
Lavar com água corrente. Retirar o excesso de água.
Cobrir com a solução de iodo e deixar em contacto 1 minuto.
Decantar e lavar com água corrente.
Descolorar com o Descolorante até que deixe de produzir-se
a cor violeta.
Lavar com água.
Corar com o corante de contraste durante 1 minuto.
Lavar com água e secar ao ar.
Notas ao método
A técnica descrita anteriormente pode ser modificada de acordo com
as preferências do operador para obter maior ou menor intensidade de
coloração, o que implica variações nos tempos de coloração, descoloração,
lavagem, etc.
As culturas e as preparações envelhecidas podem produzir resultados
atípicos. Por este motivo, recomenda-se a utilização de culturas de 18-24
h, no máximo, e esfregaços recentes.
É também importante controlar a fixação pelo calor (duas ou três passagens
de um segundo por chama suave); um excesso do mesmo pode produzir
colorações incorrectas.
Se for utilizada água corrente para a lavagem, ter presente que águas com
elevado teor de cloro podem debilitar a coloração de contraste.
Bibliografia
Clarck, G. (1981) “Staining Procedures”, 4th ed., Williams & Willkins.
Bartholomew, J. M., Mittwer, T. (1952), Bacteriol. Rev., 16, 1-29.
Ref. 99 72 17
Ref. 99 04 37
Principe
La coloration de Gram permet de distinguer deux grands groupes de
microorganismes: ceux qui retiennent le colorant primaire (Gram-positif) et
ceux qui le perdent en raison de la structure de leur paroi cellulaire et qui se
colorent avec le colorant de contraste (Gram-négatif).
Le procédé nécessite les quatre réactifs suivants : un colorant primaire, une
solution d’iode-iodure, un décolorant et un colorant de contraste.
Réactifs
Colorants primaires
a) Violet de gentiane
Composition
Colorant violet de gentiane
Éthanol
b) Violet de gentiane phéniqué
Composition
Colorant violet de gentiane
Éthanol
Phénol
Solution d’iode lugol
Composition
Iode
Iodure de potassium
Décolorant Gram
Composition
Isopropanol
Acétone
Colorants de contraste
a) Safranine
Composition
Safranine
Éthanol
b) Fuchsine Gram:
Composition
Fuchsine basique
0,02 %
Technique
1x
1x
1x
6x
500 ml
1 000 ml
5 000 ml
250 ml
Préparer un étalement, puis fixer délicatement à la flamme.
Réf. 99 52 02
Réf. 99 45 00
Réf. 99 98 02
Réf. 99 99 13
1.
2.
3.
0,40 %
15 %
1 x 500 ml
1 x 1 000 ml
1 x 5 000 ml
4.
5.
Réf. 99 79 28
Réf. 99 79 41
Réf. 99 65 57
6.
7.
8.
0,45 %
13 %
1%
1 x 500 ml
1 x 1 000 ml
Couvrir le frottis avec le colorant primaire. Laisser reposer
pendant 1 minute.
Laver à l’eau courante. Retirer l’excès d’eau.
Couvrir avec la solution d’iode et laisser en contact pendant
1 minute.
Décanter et laver à l’eau courante.
Décolorer avec le décolorant jusqu’à ce que le violet cesse de
se produire.
Laver à l’eau courante.
Colorer avec le colorant de contraste pendant 1 minute.
aver à l’eau et sécher à l’air libre.
Observer avec un objectif à immersion.
Résultats
Bactéries Gram-positif : violet foncé.
Bactéries Gram-négatif : rouge orangé.
Réf. 99 30 85
Réf. 99 88 42
0,4 %
0,8 %
1 x 1 000 ml
1 x 5 000 ml
6 x 250 ml
Réf. 99 04 89
Réf. 99 11 10
Réf. 99 76 70
70 %
30 %
1x
1x
1x
6x
500 ml
1 000 ml
5 000 ml
250 ml
Réf. 99 99 21
Réf. 99 87 15
Réf. 99 65 01
Réf. 99 98 04
1 x 1 000 ml
6 x 250 ml
Remarques
La technique décrite ci-dessus peut être modifiée selon les préférences de
l’utilisateur pour obtenir une intensité de coloration supérieure ou
inférieure, ce qui se traduit par des variations dans les temps de coloration,
de décoloration, de lavage, etc.
Les cultures et les préparations anciennes peuvent donner lieu à des résultats
atypiques. Pour cette raison, il est recommandé d’utiliser des cultures de 18
à 24 heures au maximum et des étalements récents.
Par ailleurs, il est important de bien contrôler la fixation à la chaleur (deux à
trois passages d’une seconde sur une flamme douce); un excès de chaleur
peut provoquer des colorations erronées.
Si de l’eau courante est utilisée pour le lavage, il faut tenir compte que l’eau
fortement chlorée peut affaiblir la coloration de contraste.
Bibliographie
Clarck, G. (1981) “Staining Procedures”, 4th ed., Williams & Willkins.
Bartholomew, J. M., Mittwer, T. (1952), Bacteriol. Rev., 16, 1-29.
0,4 %
20 %
Réf. 99 72 17
Réf. 99 04 37
0,02 %
Conservação e estabilidade
Armazenados à temperatura ambiente (15 - 25º C), os reagentes são
estáveis até ao prazo de validade indicado no rótulo.
Conservation et stabilité
Conservés à température ambiante (15 à 25 °C), les réactifs restent stables
jusqu’à la date de péremption indiquée sur l’étiquette.
Precaução
A Violeta Cristal e a Violeta de Genciana Fenicada são inflamáveis
e nocivas quando ingeridas. A Safranina é inflamável e o Descolorante
Gram inflamável e irritante.
Manusear os corantes com precaução e consultar a ficha de dados de
segurança antes da sua utilização.
A eliminação dos resíduos deve ser realizada segundo a legislação em
vigor.
Précautions d’emploi
Le violet de gentiane et le violet de gentiane phéniqué sont inflammables
et nocifs en cas d’ingestion. La safranine est inflammable et le décolorant
Gram est inflammable et irritant.
Manipuler les colorants avec précaution et consulter la fiche de données de
sécurité avant utilisation.
L’élimination des déchets doit être effectuée conformément aux normes en
vigueur.
QUIMICA CLINICA APLICADA S.A.
Empresa Certificada ISO 9001 / ISO 13485
A 7 Km 1081 – P.O. Box 20 - E43870 AMPOSTA / ESPANHA
Tel. ++ 34 (977) 70. 62. 30 Fax ++ 34 (977) 70. 30. 40
Revisão: Julho 2011
QUIMICA CLINICA APLICADA S.A.
Enterprise certifiée ISO 9001 / ISO 13485
A 7 Km 1081 – P.O. Box 20 - E43870 AMPOSTA / SPAIN
Tel. ++ 34 (977) 70. 62. 30 Fax ++ 34 (977) 70. 30. 40
Révision: Juillet 2011
PRO4_REG9_GRAM_5
Échantillons
Étalements provenant de cultures bactériennes. Échantillons provenant
de différents fluides corporels : exsudats, fluides pulmonaires, sédiments
d’urine, etc.
Manipuler les échantillons avec précaution en raison de leur potentiel
infectieux.
PRO4_REG9_GRAM_5
958 412 886
629 636 705
http://www.cromakit.es/
Calle Tucumán 8 Nave B 18200 Maracena (Granada)