(Microsoft PowerPoint - Valida\347\343o Techno \(Ana Paula Cozac
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(Microsoft PowerPoint - Valida\347\343o Techno \(Ana Paula Cozac
Techno TwinStation Ana Paula Costa Nunes da Cunha Cozac Hemocentro de Ribeirã Ribeirão Preto Techno TwinStation Techno TwinStation Realizados testes para validação da automação (Techno) para pacientes Total de 299 amostras foram testadas para: Tipagem ABO, Rh D Pesquisa de quimeras ABO e RhD artificiais Pesquisa de anticorpos irregulares (soro e plasma) Identificação de anticorpos irregulares (soro e plasma) Autocontrole Techno TwinStation Objetivos da validação da automação para pacientes Avaliar a capacidade de realização de tipagem ABO nas seguintes situações 1. Na presença de dupla população seja por subgrupo seja por politransfusão 2. Em pacientes imunodeprimidos por QT (detectar Ig em baixos títulos) 3. Presença de interferentes (MM) 4. Presença de quimeras 5. Presença de autoanticorpo em altos títulos Avaliar a capacidade de realização de tipagem RhD nas seguintes situações 1. Presença de interferentes (MM) 2. Presença de quimeras 3. Presença de autoanticorpo em altos títulos Techno TwinStation Objetivos da validação da automação para pacientes Avaliar a sensibilidade e especificidade da PAI 1. Detectar anticorpos de importância clínica 2. Não detectar anticorpos frios 3. Reproduzir resultados da rotina 4. Utilizando plasma x soro Avaliar a sensibilidade e especificidade da IAI 1. Identificar anticorpos de importância clínica 2. Identificar anticorpos com efeito de dose 3. Utilizando plasma x soro Techno TwinStation Objetivos da validação da automação para pacientes VERIFICAR SE HÁ REPRODUTIBILIDADE DOS RESULTADOS OBTIDOS NA ROTINA Techno Patologias TwinStation Número Doença de base 5 LMC 2 LLC 6 LMA 2 LLA 11 SMD 3 AA 4 Beta Talassemia 2 Anemia Falciforme 16 Mieloma Múltiplo 4 Linfoma 1 Policitemia Vera 1 Mielofibrose 1 Ca de Pulmão 1 Sarcoma de Ewing 1 Síndrome de Mey Hegglin 1 Rabdomiossarcoma 1 Traombastenia de Glansmam 1 Neoplasia de Mama 234 Diversos 299 Total Techno TwinStation Anticorpos testados na PAI utilizando plasma 5 plasmas contendo anti-D 1 plasma contendo anti-K 2 plasmas contendo anti-E 1 plasma contendo anti-c 1 plasma contendo anti-Jka 1 plasma contendo anti-s 1 plasma contendo anti-D, -C, -K 1 plasma contendo anti-Leb 1 plasma contendo anti-M com efeito de dose Todos os resultados foram concordantes com os testes realizados na rotina transfusional utilizando soro Techno TwinStation Anticorpos testados na PAI utilizando plasma PAI + paciente MM em atividade 27 soros com PAI + (rotina) = 23 plasmas com PAI + Techno (4 PAI por anticorpo frio) Maior especificidade 186 soros com PAI - (rotina) = 186 plasmas com PAI - Techno PAI negativa em paciente sem anticorpo Total de 227 plasmas testados Techno TwinStation Analisando os resultados da PAI: 1. Quanto à capacidade de detectar anticorpos de importância clínica Anticorpos clinicamente significantes foram detectados (anti-D, -K, -E, -c, -Jka, -s, -C) 2. Quanto à sensibilidade da PAI Anticorpos em baixo título e apresentando efeito de dose também foram detectados (anti-Leb , -M com efeito de dose) As intensidade de reação foram as mesmas da rotina quando da utilização de soro. 3. Quanto à especificidade Pacientes com PAI (soros previamente testados) tiveram seus plasmas testados e confirmados como negativos Techno TwinStation 4. Quanto à reprodutibilidade soro x plasma Anticorpos clinicamente significantes foram detectados (anti-D, -K, -E, -c, -Jka, -s, -C) no plasma da mesma forma que foram detectados no soro. Techno TwinStation Anticorpos testados na IAI utilizando plasma 5 plasmas contendo anti-E 1 plasma contendo anti-Dia, -K 8 plasmas contendo anti-D 1 plasma contendo anti-D, -K, -Dia 1 plasmas contendo anti-Dia 3 plasma contendo anti-C, -D 1 plasma contendo anti-e 1 plasma contendo anti-C, -D, -K 1 plasma contendo anti-c 1 plasma contendo anti-D, -K 2 plasma contendo anti-S 1 plasma contendo anti-E, -c 3 plasmas contendo anti-K 1 plasma contendo anti-Leb 3 plasma contendo anti-Jka 3 plasma contendo anti-M com efeito de dose 38 plasmas foram testados, todos os resultados foram concordantes com os testes realizados na rotina transfusional utilizando soro Techno TwinStation Analisando os resultados da IAI: 1. Quanto à capacidade de identificar anticorpos de importância clínica Anticorpos clinicamente significantes foram detectados (anti-D, -K, -E, -e, -c, -Jka, -S, -C, -Dia) 2. Quanto à sensibilidade da IAI Anticorpos em baixo título e apresentando efeito de dose também foram identificados (anti-Leb , -M com efeito de dose) As intensidade de reação foram as mesmas da rotina quando da utilização de soro. 3. Quanto à especificidade Resultados compatíveis com os da rotina Techno TwinStation 4. Quanto à capacidade de identificar anticorpos de importância clínica soro x plasma Anticorpos clinicamente significantes foram detectados (anti-D (2), -K (2), -E (2), -e (1), -c (1), -S (1), -C (1), -Dia (4)) no plasma da mesma forma que foram detectados no soro. Techno TwinStation Autocontrole: Foram testadas 12 amostras com autocontrole positivo LISS/Coombs Enzima Autocontole negativo 6 amostras 7 amostras Autocontrole positivo 6 amostras 5 amostras Todos os resultados foram compatíveis com os da rotina Techno TwinStation Tipagem ABO 227 amostras de pacientes foram testadas 214 apresentaram tipagem ABO sem discrepância 13 apresentaram discrepância ABO: 6 delas haviam sido detectadas na rotina 7 não foram detectadas na rotina Em ambas situações os pacientes apresentavam doença de base que justificasse o aparecimento de discrepância ABO. Techno TwinStation Tipagem ABO ABO Discrepância Motivo da discrepância 1 B+ DP na direta Pac cronicamente transfundido com HcO Beta Talassemia 2 A+ DP na direta Pac cronicamente transfundido com HcO Beta Talassemia 3 A+ Direta de A reversa de AB Redução na produção de Imunoglobulina SMD 4 B+ DP na direta Pac cronicamente transfundido com HcO Anemia Falciforme 5 O+ Direta de B e reversa de O Pac com hipergamaglobulinemia 6 B+ DP na direta Pac cronicamente transfundido com HcO Anemia Falciforme 7 B+ Direta de B reversa de O Pico monoclonal 8 AB+ Direta de AB e reversa de O Síndrome de hiperviscosidade LMC 9 O- Direta de A e reversa de O LLC Paciente com hipergamaglobulinemia Diagnóstico LNH MM em atividade Techno TwinStation Tipagem ABO ABO Discrepância Motivo da discrepância 10 B+ Reversa de AB Condicionamento pré-Transplante MM pré-transplante 11 O+ Reversa de A Condicionamento pré-Transplante MM 12 A+ Reversa de O (reag Hc A2) Pico Monoclonal MM em atividade 13 A+ Reversa de O (reag Hc A2) Pico Monoclonal MM em atividade Sem discrepância Rotina (direta de AB) Hipergamaglobulinemia LNH O+ Diagnóstico Techno TwinStation Paciente com MM em atividade. Paciente é A. Reversa era considerada + com HcA2 Techno Tipagem ABO Beta Talassemia em transfusão crônica Paciente é B CM na direta com soro anti-A TwinStation Techno TwinStation Paciente portador MM em condicionamento pré-transplante. Paciente é O Reversa negativa com HcA Techno TwinStation Paciente portador de MM em atividade. Paciente é A. Reversa reagiu com Hc A2 Techno TwinStation Paciente portador de MM em condicionamento pré-transplante. Paciente é B. Direta de B e reversa de AB Techno TwinStation Tipagem ABO em paciente com altos títulos de autoanticorpo da classe IgG Techno TwinStation Tipagem ABO Finalidade do teste: Detectar população de células antígeno-positivas na presença de dupla população seja por subgrupo seja por politransfusão • O teste foi mais sensível que o realizado na rotina, provavelmente pela retirada do efeito “conhecimento prévio”. • Pacientes cronicamente transfundidos puderam ser fenotipados apesar da discrepância Detectar Ig em baixos títulos em pacientes imunodeprimidos por QT • De 227 casos em apenas 3 não houve detecção da Ig na reversa (rotina com mesmo resultado) Techno TwinStation Tipagem ABO Finalidade do teste: Possibilitar a tipagem ABO mesmo na presença de interferentes (MM) • De 227 casos em apenas 6 houve interferência de Ig (resultado compatível com o da rotina), porém, em um caso apesar da presença de Ig interferindo na tipagem da rotina o mesmo não ocorreu com a tipagem realizada pelo Techno. Possibilitar a tipagem ABO mesmo na presença de autoanticorpo em altos títulos • Na amostra testada houve interferência da tipagem ABO e RhD (resultado compatível com o da rotina). Techno TwinStation Avaliação de Quimera ABO % de hemácias A % de hemácias O Resultado A+ 90% O+ 10% A+ A+ 80% O+ 20% A+ A+ 70% O+ 30% A+ A+ 60% O+ 40% A+ (reação anti-A 1+) A+ 50% O+ 50% A+ (reação anti-A 1+) Techno TwinStation Avaliação de Quimera ABO % de hemácias B % de hemácias O Resultado B+ 90% O+ 10% B+ B+ 80% O+ 20% B+ B+ 70% O+ 30% B+ B+ 60% O+ 40% B+ B+ 50% O+ 50% B+ Techno TwinStation Avaliação de Quimera RhD % de hemácias O+ % de hemácias O- Resultado O+ 90% O- 10% O+ O+ 80% O- 20% O+ O+ 70% O- 30% O+ O+ 60% O- 40% O+ (CM) O+ 50% O- 50% O+ (CM) O+ 40% O-60% O- O+ 30% O- 70% O- O+ 20% O- 80% O- O+ 10% O- 90% O- Techno TwinStation Quimera de RhD Fenotipagem RhD- em quimera com 40% Hc D+ Techno TwinStation Quimeras de RhD 90% 80% 70% 60% 50% 40% 30% Techno TwinStation Analisando os resultados da pesquisa de quimeras: Quanto à capacidade de detectar hemácias antígeno-positivas. Detecção de hemácias A dentro de uma população de hemácias O: houve redução de sensibilidade quando da presença de 60% de Hc antígeno-positivas Detecção de hemácias B dentro de uma população de hemácias O: não houve redução de sensibilidade das amostras com até 50% de Hc antígeno-positivas Detecção de hemácias D+ dentro de uma população de hemácias D-: houve redução de sensibilidade das amostras com até 60% de Hc antígeno-positivas. Houve perda de sensibilidade das amostras a partir de 40% de Hc antígeno-positivas. Techno TwinStation Tipagem RhD de amostras que se mostraram D fraco na rotina: LI ≤ 2+: 22 amostras Positivo apenas em AGH: 5 amostra Reatividade Microplaca rotina Microplaca Techno MC rotina + MC Techno 1 Total 1 2 2 3 2 5 2 2 2 5 9 1 17 67% Techno TwinStation O aparelho foi capaz de realizar os teste de tipagem ABO/RhD, PAI e IAI de amostras nas seguintes condições: Presença de hemólise Techno TwinStation O aparelho foi capaz de realizar os teste de tipagem ABO/RhD, PAI e IAI de amostras nas seguintes condições: Amostra de paciente com síndrome de hiperviscosidade por LMC em crise blástica Techno TwinStation O aparelho foi capaz de realizar os teste de tipagem ABO/RhD, PAI e IAI de amostras nas seguintes condições: Amostra de paciente extremamente anêmico Techno • TwinStation O aparelho apresentou reprodutibilidade uma vez que 3 paciente tiveram suas amostras testadas em 3 baterias realizadas em diferentes dias apresentando os mesmos resultados em todas as baterias. • Houve reprodutibilidade dos teste, em relação aos previamente realizados na rotina, em amostras colhidas em diferentes datas de coleta, que variou de 1 a 7 dias. • 9 amostras A R1r e 9 amostras O R1r foram fenotipadas para RhD para verificar a sensibilidade do teste e todas apresentaram boa reatividade. Techno • TwinStation O tempo gasto em média para uma bateria de 36 amostras foi de 1h 8mim e o correspondente na nossa rotina atual semi-automatizada é de 2h 30 min (não incluído IAI). • A vantagem do Techno sobre a rotina atual, em relação a pacientes, é que ele usa a técnica de gel para PAI além de realizar a IAI. • Testes futuros devem ser feitos para pacientes que necessitem de transfusões esporádicas com vistas a auxiliar a rotina pré-transfusional de pacientes não complicados (pré-cirúrgico). Techno TwinStation Agradecimentos Denise Rondi Luciana Corrêa Oliveira Techno TwinStation [email protected]
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