CARB - Roche

0020737828322COINV8.0
CARB
Carbamazepine
Monitorização de drogas terapêuticas
Informações para encomenda
REF
CONTENT
20737828 322
Carbamazepine (200 testes)
03375790 190
04521536 190
20720720 322
Preciset TDM I
Calibrators A-F (6 × 1 × 5 mL)
Diluent (1 × 10 mL)
TDM Control Set
Level I (2 × 5 mL)
Level II (2 × 5 mL)
Level III (2 × 5 mL)
COBAS FP Sample Dilution Reagent II
Analisadores onde o suporte de reagentes cobas c
pack pode ser utilizado
400 plus
System-ID 07 3782 8 COBAS INTEGRA
COBAS INTEGRA 800
System-ID 07 6830 8
System-ID 07 6900 2
System-ID 07 6901 0
System-ID 07 6902 9
System-ID 07 2072 0
Português
Armazenamento e estabilidade
Informações do sistema
Teste CARBM, ID do teste 0‑282.
Validade a 2‑8 °C
Finalidade
Teste para diagnóstico in vitro destinado à determinação quantitativa da
carbamazepina em soro e plasma heparinizado nos sistemas
COBAS INTEGRA.
Sumário
A carbamazepina é um fármaco anti-epiléptico destinado ao tratamento da
epilepsia, da neuralgia do trigémeo e das crises convulsivas simples e
complexas, parciais e generalizadas nos adultos. É eficaz como agente
exclusivo no tratamento das doenças acima referidas, mas pode ser
utilizado em conjunto com outros fármacos anti-epilépticos.
Princípio do teste
Fluorescência polarizada.
As medições para monitorização de drogas terapêuticas COBAS INTEGRA
são feitas nos sistemas COBAS INTEGRA utilizando o princípio de
fluorescência polarizada. Quando uma molécula fluorescente, ou fluoróforo,
é irradiada com luz de um comprimento de onda adequado (comprimento
de onda de excitação), uma parte da luz é absorvida. No espaço de alguns
nano-segundos é emitida a luz absorvida, embora a um comprimento de
onda mais longo (comprimento de onda de emissão). A polarização ou não
da luz emitida depende da liberdade de rotação do fluoróforo na solução.
Uma molécula pequena, como a fluoresceína, pode rodar rapidamente
antes de ocorrer emissão de luz, dando origem à despolarização da luz
emitida. Contrariamente, uma macromolécula fluorescente, como a
proteína marcada com fluoresceína, rodará muito mais lentamente. Assim,
no espaço de tempo entre a excitação e a emissão, a macromolécula terá
rodado apenas ligeiramente e a luz emitida será polarizada.1 A
fluorescência polarizada é uma função reprodutível da concentração da
droga e é adequada à determinação quantitativa das concentrações da
droga no soro, para fins de monitorização de drogas terapêuticas.
Os agentes activos de superfície são utilizados para garantir a dissociação
da droga das proteínas séricas e para prevenir a ligação não específica do
marcador.
Reagentes - soluções de trabalho
R1
Reagente de anticorpos
Anticorpo policlonal anti-carbamazepina de soro de ovelha em
tampão, pH 7.5, com estabilizante e conservante
SR
Reagente de marcador
Derivado de carbamazepina marcado com fluoresceína em
tampão, pH 7.5, com estabilizante e conservante.
A posição do R1 é B, do SR é C.
Precauções e avisos
Preste atenção a todos os avisos e precauções incluídos na
Secção 1 / Introdução deste Manual de Métodos.
Preparação dos reagentes
Pronto a ser utilizado
2013-08, V 8.0 Português
Consulte o prazo de
validade no rótulo do
cobas c pack.
Sistema COBAS INTEGRA 400 plus
No analisador a 10‑15 °C
12 semanas
Sistema COBAS INTEGRA 800
No analisador a 8 °C
26 semanas
O período de estabilidade no analisador tem início no momento da
perfuração do dispositivo cobas c pack.
Colheita e preparação das amostras
Para colheita e preparação das amostras, utilize apenas tubos ou cuvetes
de amostra apropriados.
Apenas as amostras indicadas em seguida foram testadas e consideradas
aceitáveis.
Soro não hemolisado ou plasma heparinizado não hemolisado.
Os tipos de amostras indicados foram testados usando tubos de colheita
de amostras seleccionados e comercialmente disponíveis à data do teste,
i.e. nem todos os tubos dos diferentes fabricantes disponíveis no mercado
foram testados. Os sistemas de colheita de amostras de diferentes
fabricantes podem, por sua vez, conter materiais diferentes que, em alguns
casos, podem afectar os resultados dos testes. Se processar amostras em
tubos primários (sistemas de colheita de amostras) consulte as instruções
do fabricante dos tubos.
As amostras que contêm precipitado têm de ser centrifugadas antes da
realização do ensaio.
O tempo de colheita normal varia conforme a determinação teórica dos
valores de pico e de vale.2 As amostras devem ser analisadas no prazo de
8 horas após a colheita, caso sejam mantidas à temperatura ambiente. Se
as amostras tiverem de ser guardadas para análise posterior, podem ser
conservadas a uma temperatura entre 2‑8 °C durante um máximo de
48 horas ou a uma temperatura ‑20 °C, para períodos mais longos. As
amostras não devem ser congeladas e descongeladas repetidamente.
As amostras descongeladas devem ser invertidas várias vezes antes de o
teste ser realizado.
Materiais fornecidos
Consulte a secção “Reagentes - soluções de trabalho” para mais
informações sobre os reagentes.
Materiais necessários (mas não fornecidos)
COBAS FP Sample Dilution Reagent (SDR II), Ref. 20720720 322
O SDR II é colocado como diluente especial na respectiva posição do rack
predefinida e permanece estável durante 7 dias nos analisadores
COBAS INTEGRA 400 plus/800.
Ensaio
Para assegurar a correcta execução do ensaio é importante cumprir as
instruções fornecidas neste documento para o analisador utilizado.
Consulte o manual do operador apropriado para obter instruções mais
específicas sobre o ensaio feito neste analisador.
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Carbamazepine
Monitorização de drogas terapêuticas
Aplicação para soro e plasma
Nota
Os calibradores devem ser analisados no prazo de 2 horas após a sua
colocação no analisador.
Definição do teste COBAS INTEGRA 400 plus
Modo de medida
FP
Modo de reacção
R1-SDR/S-SR
Comprimento de onda
Controlo da qualidade
excitação 485 nm
emissão
515 nm
Ciclo de leitura branco/teste
29/45
Unidade
µg/mL
Parâmetros de pipetagem
Diluente (H2O)
R1
145 µL
10 µL
Amostra
2 µL
5 µL
Diluente especial (SDR II)
8 µL
SR
15 µL
Volume total
195 µL
10 µL
Definição do teste COBAS INTEGRA 800
Modo de medida
FP
Modo de reacção
R1-SDR/S-SR
Comprimento de onda
515 nm
Ciclo de leitura branco/teste
40/60
Unidade
µg/mL
Parâmetros de pipetagem
Diluente (H2O)
R1
145 µL
10 µL
Amostra
2 µL
5 µL
Diluente especial (SDR)
8 µL
SR
15 µL
Volume total
195 µL
10 µL
Calibração
Calibradores
Preciset TDM I
Calibradores A-F
Conc. de carbamazepina
0, 1.25, 2.5, 5, 10, 20 µg/mL
(0, 5.3, 10.6, 21.2, 42.3, 84.6 µmol/L)
Modo de calibração
Logit/log 4
Repetição da calibração
Duplicado recomendado
Desvio baixo/alto
< 10 % a ≥ 1.25 µg/mL (≥ 5.3 µmol/L)
Intervalo de calibração
Com cada lote, de 16 em 16 semanas, e
conforme necessário, segundo os
procedimentos de controlo da qualidade.
A curva de calibração tem de ser preparada utilizando os calibradores
Preciset TDM I. Os calibradores devem ser colocados no suporte CAL/QC
de forma a que fiquem em primeiro lugar os que têm a concentração mais
elevada (F) e em último os que têm a concentração mais baixa (A). Esta
curva é guardada na memória pelos sistemas COBAS INTEGRA, podendo
ser consultada para uso futuro.
Rastreabilidade: Os calibradores Preciset TDM I são preparados de forma
a conter quantidades conhecidas de carbamazepina em soro humano
normal, e são rastreáveis em relação aos padrões de referência da USP.
CARB
TDM Control Set
Intervalo de controlo
24 horas (recomendado)
Sequência de controlo
Definida pelo utilizador
Controlo após calibração
Recomendado
Para o controlo da qualidade, utilize os materiais de controlo indicados na
secção "Informações para encomenda". Adicionalmente, pode ser utilizado
outro material de controlo adequado.
Os intervalos e limites de controlo deverão ser adaptados às exigências
específicas de cada laboratório. Os valores obtidos devem situar-se dentro
dos limites definidos. Cada laboratório deve estabelecer as medidas
correctivas a tomar no caso de os valores se situarem fora dos limites
definidos.
Cumpra os regulamentos governamentais aplicáveis e as directrizes locais
de controlo da qualidade.
Nota
Os controlos devem ser analisados no prazo de 2 horas após a colocação
no analisador.
Cálculo dos resultados
Os analisadores COBAS INTEGRA calculam automaticamente a
concentração do analito de cada amostra. Para mais informações, consulte
a secção Análise de dados na Ajuda online (analisadores
COBAS INTEGRA 400 plus/800).
Factor de conversão: µg/mL x 4.23 = µmol/L
excitação 485 nm
emissão
Controlo da qualidade
Limitações – interferências
Consulte a secção "Especificidade analítica" deste folheto informativo para
obter mais informações acerca das substâncias analisadas neste ensaio
em termos de reactividade cruzada. É possível que outras substâncias e/ou
factores interfiram com o teste e produzam resultados errados (por
exemplo, erros técnicos ou de procedimento).
As amostras com valores superiores ao calibrador mais elevado serão
assinaladas pelo sistema e terão de ser repetidas após diluição manual
apropriada da amostra original com o diluente Preciset TDM I Diluent
(0 µg/mL). As amostras com fundos fluorescentes elevados ou com valores
de polarização superiores ao calibrador zero serão assinaladas pelo
sistema.
Critério: Recuperação dentro de ± 10 % do valor inicial numa concentração
de carbamazepina a 11 µg/mL (46.5 µmol/L)
Icterícia:3 Nenhuma interferência significativa até a uma concentração
aproximada de bilirrubina de 342 µmol/L ou 20.1 mg/dL.
Hemólise:3 Nenhuma interferência significativa até a uma concentração
aproximada de hemoglobina de 466 µmol/L ou 750 mg/dL
Lipemia:3 Nenhuma interferência significativa até uma concentração de
triglicéridos de 2164 mg/dL.
Proteínas totais: Nenhuma interferência significativa até uma concentração
de proteínas totais de 4‑10 g/dL
Quando o objectivo é o diagnóstico, os resultados devem ser sempre
interpretados em conjunto com a história clínica do paciente, o exame
clínico e outros resultados.
ACÇÃO NECESSÁRIA
Programação de lavagem especial: É obrigatória a utilização de ciclos de
lavagem suplementares sempre que determinadas combinações de testes
sejam executadas em conjunto nos analisadores COBAS INTEGRA. Para
instruções mais detalhadas, consultar a Introdução do Manual de métodos,
secção Ciclos de lavagem suplementares.
Onde requerido, a programação de lavagem especial/carry‑over
(arrastamento) deve ser implementada antes de reportar os resultados
deste teste.
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Carbamazepine
Monitorização de drogas terapêuticas
Limites e intervalos
Intervalo de medição
Analisador COBAS INTEGRA 400 plus:
0.11‑20.0 µg/mL (0.47‑84.6 µmol/L)
Analisador COBAS INTEGRA 800:
0.12‑20.0 µg/mL (0.51‑84.6 µmol/L)
Limites inferiores de medição
Limite inferior de detecção do teste:
Analisador COBAS INTEGRA 400 plus:
0.11 µg/mL (0.47 µmol/L)
Analisador COBAS INTEGRA 800:
0.12 µg/mL (0.51 µmol/L)
O limite de detecção inferior representa o nível de analito mais baixo
mensurável passível de ser distinguido do calibrador zero a um intervalo de
confiança de 95 %.
Valores teóricos
Após administração por via oral, a absorção é lenta e irregular, com um
nível plasmático de pico entre 4‑8 horas (ou durante mais tempo). A semivida referida é de 5‑25 horas. Os níveis terapêuticos foram relatados como
sendo entre 4 - 8 µg/mL (16.9 - 33.8 µmol/L) quando a carbamazepina é
administrada concomitantemente com outros anticonvulsivantes, e entre
6 ‑ 12 µg/mL (25.4 - 50.8 µmol/L), quando administrada isoladamente. Nos
seres humanos a carbamazepina é quase completamente metabolizada a
carbamazepina‑10,11 epóxido, que é o composto farmacologicamente
activo.4,5,6,7,8,9
Quando presente em níveis tóxicos, a carbamazepina pode provocar
diplopia, ataxia, visão desfocada, sonolência, distúrbios gastrointestinais e
dores de cabeça.
Cada laboratório deve verificar a transferibilidade dos valores teóricos para
a sua própria população de pacientes e, se necessário, determinar os seus
próprios intervalos de referência.
Dados específicos sobre o desempenho
São apresentados a seguir dados representativos do desempenho dos
analisadores COBAS INTEGRA. Os resultados podem diferir de laboratório
para laboratório.
Precisão
A precisão foi determinada utilizando controlo de acordo com os requisitos
da NCCLS EP5-T210 com repetibilidade e precisão intermédia (2 aliquotas
por série, 2 série por dia, 20 dias).Obtiveram-se os seguintes resultados
num analisador COBAS INTEGRA 700:
Ordenada na origem
-0.124 µg/mL
Coeficiente de correlação
0.995
Especificidade analítica
Foram avaliadas as seguintes substâncias com reactividade cruzada nos
sistemas COBAS INTEGRA em soro humano normal spiked com
carbamazepina a 10 µg/mL (42.3 µmol/L). Cada substância foi testada
numa concentração 10 vezes superior à concentração mais elevada para o
intervalo terapêutico ou normal, de acordo com o protocolo descrito pelo
NCCLS.11 A imprecisão do ensaio foi tida em consideração ao determinar a
reactividade cruzada. A reactividade cruzada foi designada como “não
detectável” (ND) quando os valores obtidos foram inferiores à sensibilidade
do teste.
Reactividade
cruzada (%) =
100 × (resultado analítico - concentração de analito)
concentração de interferente
Nível testado
µg/mL
Reactividade
cruzada
(%)
Carbamazepina-10,11 epóxido
14.8
21.4
Oxcarbazepina (Oxc)
15.0
5.3
10-Hidroxi-carbamazepina (MHD)
15.0
3.3
10
3.2
Diazepam
25
0.9
Fenilbutazona
450
0.7
Fenobarbital
400
ND
Fenitoína
200
ND
Fármaco
Imipramina
Num estudo semelhante, os seguintes compostos relacionados
estruturalmente ou potencialmente coadministrados foram testados no
COBAS FARA II utilizando soro humano normal spiked com
carbamazepina a 10 µg/mL (42.3 µmol/L).
Nível testado
µg/mL
Reactividade
cruzada
(%)
Etossuximida
1000
< 0.2
1000
< 0.2
1.2
ND
Fármaco
Média
µg/mL (µmol/L)
DP
µg/mL (µmol/L)
CV
%
Ácido valpróico
Nível 1
3.83 (16.1)
0.08 (0.34)
2.2
Glutetimida
8
ND
Nível 2
8.55 (36.4)
0.17 (0.72)
1.9
Primidona
120
ND
Nível 3
14.7 (62.2)
0.31 (1.31)
2.1
Secobarbital
150
ND
Repetibilidade
Clonazepam
Precisão intermédia
Média
µg/mL (µmol/L)
DP
µg/mL (µmol/L)
CV
%
ND = não detectável
Nível 1
3.83 (16.1)
0.12 (0.51)
3.0
Nível 2
8.55 (36.4)
0.24 (1.02)
2.8
Qualquer modificação do analisador em relação ao referido no presente
documento requer validação pelo laboratório.
Nível 3
14.7 (62.2)
0.52 (2.20)
3.6
Comparação dos métodos
Os valores de carbamazepina para amostras de soro humano obtidos com
o analisador COBAS INTEGRA 700 utilizando o reagente COBAS
INTEGRA Carbamazepine foram comparados com os valores
determinados utilizando um método FPIA disponível comercialmente.
FPIA
Número de amostras
Intervalo de valores
Declive
2013-08, V 8.0 Português
205
mín.
1.6 µg/mL
máx.
19.6 µg/mL
1.061
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reaction by the polarization of fluorescence. Biochem Biophys Res
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11 National Committee for Clinical Laboratory Standards. Interference
Testing in Clinical Chemistry; Proposed Guideline. Villanova, PA.:
NCCLS; 1986;6(13). NCCLS Publication EP7-P.
Nesta Folha de Métodos é sempre utilizado um ponto como separador de
casas decimais para marcar a separação entre o número inteiro e as partes
fraccionadas de um número decimal. Não são utilizados separadores de
milhares.
Símbolos
Roche Diagnostics utiliza os seguintes símbolos e sinais além dos listados
na norma ISO 15223‑1.
CONTENT
Conteúdo do dispositivo
Volume após reconstituição ou mistura
As alterações ou os acréscimos significativos estão assinalados por uma barra de alteração na margem.
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