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Sociedade Brasileira de Química (SBQ)
Estudo dos efeitos na cinética
antimicrobiano homotarsinina
1
de
1
dimerização
do
2
peptídeo
Carlos F. Guimarães (PG)*, Rodrigo M. Verly (PQ), Jarbas M. Resende (PQ), Dorila Piló-Veloso
(PQ). [email protected]
1
2
2
Universidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri, 39.100-000, Diamantina/MG, Brasil.
Universidade Federal de Minas Gerais, 31270-901, Belo Horizonte/MG, Brasil
Palavras Chave: Peptídeos antimicrobianos, síntese em fase sólida, dimerização, Phyllomedusa tarsius.
Introdução
B)
A)
A homotarsinina (Htr) é um peptídeo antimicrobiano
isolado do anuro Phyllomedusa tarsius, que habita
1
florestas brasileiras . Sua estrutura homodimérica é
composta por cadeias de 24 resíduos de
aminoácidos unidas por uma ligação de dissulfeto
entre resíduos de cisteína (Figura 1).
C)
D)
Figura 1. Estrutura primária da Htr com uma ligação
dissulfeto entre as duas cadeias.
No entanto, o estudo de sua estrutura e atividade
fica limitado devido à pequena quantidade de Htr
que se consegue na natureza, havendo a
necessidade de sintetizá-la. Contudo, são poucos
os estudos relatando a síntese de peptídeos
diméricos. Desse modo, o presente trabalho teve
como objetivo a síntese química da cadeia
monomérica, sua caracterização, purificação e o
estudo da cinética de dimerização em solução
tampão e em meios que mimetizam ambientes de
membranas.
Resultados e Discussão
A síntese da cadeia monomérica (Htr-m) foi
realizada empregando-se a técnica de síntese em
2
fase sólida, estratégia fmoc . A purificação e o
acompanhamento cinético da dimerização foram
realizados por cromatografia líquida de alta
resolução (RP-HPLC) e a caracterização por
espectrometria de massas (MALDI-TOF). Os
resultados da síntese do monômero estão
apresentados na Figura 2A e B. Em seguida, fez-se
a dimerização em três meios distintos: (i) solução
tampão 100 mM Tris-HCl, pH 8,5, (ii) solução
micelar de SDS, pH 8,5 e (iii) solução 30% TFE/H2O
contento 100 mM Tris-HCl. Os resultados estão
apresentados na Figura 2C. É possível verificar que
em solução micelar de SDS a reação se completa
em aproximadamente 4h, enquanto que em solução
de TFE e solução tampão são necessárias 36h e
48h, respectivamente.
Resultados estruturais de CD (Figura 2D) nas com36a Reunião Anual da Sociedade Brasileira de Química
Figura 2. A) Perfil cromatográfico e B) espectro de
massas (MALDI) da amostra bruta de Htr-m.
C) Acompanhamento cinético da dimerização e D)
espectros de CD nos meios reacionais estudados.
dições de síntese mostram que Htr apresenta
conformação randômica em solução tampão TrisHCl, enquanto tende a adotar estrutura -hélice em
solução de TFE e micelas de SDS. Portanto, os
resultados do acompanhamento cinético indicam
que a estruturação do peptídeo e a diminuição de
sua mobilidade, imposta pelas micelas de SDS,
facilitam a aproximação adequada das cadeias
monoméricas favorecendo a formação da ligação de
dissulfeto.
Conclusões
A cinética de dimerização de Htr está relacionada a
fatores estruturais e de mobilidade das cadeias
monoméricas,
embora
este
último
seja
predominante na cinética de dimerização.
Agradecimentos
CNPq, CAPES, FAPEMIG.
________________
1
Prates, M. V. Peptídeos Catiônicos de Phyllomedusa tarsius
(Amphibia): estrutura e atividade biológica. Dissertação de Mestrado,
Departamento de Biologia Molecular, UNB, Brasília, 1999.
2
Chan, W. C.; White, P. D.; Fmoc Solid Phase Peptide Synthesis: A
Practical Approach. 2000, Oxford: Oxford University Press.