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CREATININA UV Liquid One Step
FINALIDADE
MATERIAIS NECESSÁRIOS, MAS NÃO FORNECIDOS
Kit para a determinação do creatinina no soro, plasma e urina pelo método enzimático UV.
1. Espectrofotômetro para 340 nm (Hg 334 ou 366 nm).
2. Cubetas de leitura.
3. Pipetas e micropipetas para os volumes citados em
PROCEDIMENTO DO TESTE.
4. Cronômetro
5. Banho ou bloco para 37ºC
6. Água destilada ou deionizada. O uso de Água Ultrapure Tipo 2, fornecida separadamente pela GT Lab, é recomendado.
SIGNIFICADO CLÍNICO
A concentração da creatinina no soro e a depuração da creatinina endógena são aceitos como parâmetros de confiança para a avaliação da
filtração glomerular e usados no controle da função do rim.
PRINCÍPIO DO ENSAIO
CDI
Creatinina + H2O —-—-—-—> N-methylhydanotoina + NH4+4+
GLDH
4+ 2-oxolgutarato + NADH —-—-—-—> glutamato + NAD++
Onde:
CDI: creatinina deiminasa
GlDH: glutamato dehidrogenasa
A diminuição da concentração do NADH, que é proporcional à concentração do creatinina na amostra, é monitorada em 340 nm.
REAGENTES FORNECIDOS
Código 812104: 1 x 45 ml
Reagente 1: 1 x 30 ml. Pronto para uso.
Reagentes 2: 1 x 15 ml. Pronto para uso.
Enzima 1: 1 vial que contem reagente em pó para dissolver num frasco
do Reagente 1.
Enzima 2: 1 vial que contem reagente em pó para dissolver num frasco
do Reagente 2.
Padrão: 1 x 4 ml. Pronto para uso.
Composição dos reagentes fornecidos
Reagente 1: cloreto de magnésio 5 mmol/l, 2-oxolgutarato de sódio 8
mmol/l em tampão Tris 50 mmol/l, pH = 8.20.
Reagente 2: cloreto de magnésio 5 mmol/l, 2-oxoglutarato de sódio 8
mmol/l 2-oxoglutarato de sódio em tampão Tris 50 mmol/l, pH = 8.20.
Enzima 1: reagente em pó para obter uma solução no Reagente 1 acima
mencionado para ter uma solução de:
NADH………… 0.4 mmol/l
GlDH………… 12000 U/l.
Enzima 2: reagente em pó para obter uma solução no Reagente 2 acima
mencionado para ter uma solução de:
CDI………………16500 U/l.
Padrão: solução de creatinina 2 mg/dl (177 µmol/l), referenciado ao
Standard Reference Material #909b (National Institute of Standards and
Technology, EEUU).
Sinais de instabilidade ou deterioração dos reagentes
O pó comprimido no Reagente 2 e a coloração ou o sedimento no Padrão
ou no Reagente 1 são indicativos da deterioração, rendendo o jogo inútil
para o uso.
Conservação e estabilidade dos reagentes
- Conserve-se em refrigerador (2-8ºC).
- Todos os reativos são estáveis até a data de vencimento marcada no
rótulo.
Cuidados e precauções
O kit é destinado somente para uso diagnóstico in vitro. A caixa e os
frascos neste produto não podem ser reutilizados. Eles devem ser descartados como resíduos perigosos de acordo com a legislação vigente.
O pessoal que manipula-los, deve ser devidamente treinado para a manipulação e eliminação pela instituição ou pelo laboratório que usa-lo.
COLETA E OBTENÇÃO DA AMOSTRA
Soro ou plasma
Heparine e EDTA são os anticoagulantes de eleição quando usar plasma.
As células ou o coagulo devem ser separados pela centrifugação dentro
dos 30 minutos depois de coletar a amostra.
Urina (espécime de 2 ou 24 horas)
Deve-se coletar em recipientes limpos.
O espécime deve ser diluído 1/50 com água destilada ou deionizada livre
de amônio antes do ensaio.
Condição de conservação da amostra:
Refrigerador (2-8ºC): 24 horas
Freezer (-20ºC): 3 meses
Substâncias Interferentes
Os componentes usuais dos espécimes não mostraram para interferir no
ensaio. Os componentes Jaffé positivos, que interferem em métodos
baseados no uso do ácido pícrico, não reagem no teste enzimático. Recomenda-se ler o trabalho de D.S. Young (veja Bibliografia).
REAGENTE DE TRABALHO
Preparação
Reagente R1 de Trabalho: adicione o conteúdo do vial de Enzima 1 em o
frasco de Reagente 1. Homogênese até dissolução.
Reagente R2 de Trabalho: adicione o conteúdo do vial de Enzima 2 em o
frasco de Reagente 2. Homogênese até dissolução.
Composição do Reagente de Trabalho
GlDH……….............................900 U/l
Tris……… ...............................50 mmol/l, pH = 8.2
CDI………… ...........................1500 U/l
2-oxoglutarato de sódio ………4.8 mmol/l
NADH…...................................0.24 mmol/l
Cloreto de Magnésio ………….3.0 mmol/l
Conservação e estabilidade dos Reagentes de Trabalho
Um mês refrigerado (2-8ºC). Proteger da luz.
Sinais de deterioração do Reagente de Trabalho
A leitura do reagente, sem adicionar amostra, deve ser al menos 1.2 D.O.
Si for menor, o reagente no deve-se usar.
PROCEDIMENTO DO TESTE
Condições de ensaio:
Comprimento de onda: 340 nm (Hg 334 ou 366 nm)
Temperatura: 30-37 ºC
Traga os reagentes e os espécimes na temperatura de quarto (15-30 ºC)
antes do uso.
Rotule 2 cubetas P (Padrão) e A (Amostra) e proceda como a seguir
(Nota 2)
P
A
Reagente R1 de Trabalho
300 µl
300 µl
Padrão
50 µl
----
----
50 µl
Amostra
Homogeneizar bem. Incubar a 37 ºC por exatamente 5
minutos. Registrar as leituras iniciais P1 e A1 em 340 nm (Nota 3).
Depois adicionar:
Reagente R2 de Trabalho
150 µl
150 µl
Homogeneizar bem. Incubar a 37 ºC por exatamente 5 minutos. Registrar as leituras P2 e A2 em 340 nm.
CÁLCULOS
Creatinina em soro ou plasma
A1 – A2
----------- x 2,0 = mg/dl creatinina
P1 – P2
Creatinina em urina
Urina de 24 horas:
A1 – A2
2,0
50
----------- x ------ x ---- x diurese (ml) = g creatinina/24 h
P1 – P2
1000 100
1. Jaffe M: Über den Niederschlag welchen Pikrinesäure in normalen Harn
Erzeugt und über eine neue Reaktion des Kreatinins. Z.Physiol.Chem.
10:391-400;1880.
2. Perrone RD, Madias NE, Levey AS: Soro creatinina as an index of renal
function; new insights into old concepts. Clin Chem 38:1933-53; 1992.
3. Lorenzo LE, Demaria I, Setta F, Taborda M: Clin. Chem. 36/6:935; 1992.
4. Sontagg O, Büttner J: Evaluation of an UV method for the determination of creatinina compared with Ektachem 700 and Fuller’s earth method. Clin.Chem. 36/6:1179;1990.
5. Young DS: Effects of disease on Clinical Lab. Tests. 4th Ed. AACC Press,
2001.
INFORMAÇÃO AOS CLIENTES
Garantia
1. Linearidade: até 10 mg/dl. Para valores maiores, repita o teste com
uma dedução da amostra em água destilada. Multiplique o resultado obtido pela dedução efetuada.
2. Especificidade: Os componentes Jaffé positivos, que interferem em
métodos baseados no uso do ácido pícrico, não reagem no teste enzimático. A amônia endógena é eliminada na primeira etapa da incubação,
rendendo um resultado específico para creatinina.
3. Sensibilidade: 0,02 mg/dl em 340 nm.
4. Precação:
Intraensayo
Media
DS mg/dl ±
C.V.%±
3 mg/dl
1,29
4,42
9,79
0,045
0,115
0,212
3,5
2,6
2,2
1 mg/dl
2 mg/dl
3 mg/dl
1,32
4,65
9,73
0,065
0,210
0,347
4,9
4,5
3,6
Interensayo
Espécime n=10
Media
DS mg/dl ±
C.V.%±
NOTAS:
1. Os volumeis da amostra e dos reagentes podem ser modificados tanto quanto as proporções indicadas no PROCEDIMENTO DO TESTE são
mantidas.
2. Aplicações para aparelhos automáticas estão disponíveis ao pedido do
cliente e a web: www.gtlab.com.ar .
3. Leituras iniciais foram inferiores a 0.800 D.O. indicam contaminação
da amostra com amônia. Neste caso, deve-se coletar uma nova amostra.
REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS
DESEMPENHO DO TESTE:
2 mg/dl
VALORES DE REFERÊNCIA
Soro ou plasma: 0.5-1.2 mg/dl
Urina: 0.8-2.0 g/24 hs
DCE.: 80-140 ml/min (adulto até 60 anos)
Cada laboratório deve estabelecer sua própria escala de acordo com a
sua população.
Código 812104: 1 x 45 ml
A1 – A2
------------ x volume (l) x 12 = g creatinina/24 h
P1 – P2
Depuração de Creatinina Endógena (DCE):
g urina creatinina /24 h
DCE = ------------------------------- x 69,4 = ml/min
mg/dl soro creatinina
Unidades internacionais (SI):
µmol/l = mg/dl x 88.5
1 mg/dl
As boas praticas de laboratório (GLP) recomendam processar amostras
normais e anormais a diário.
APRESENTAÇÃO
A1 – A2
----------- x diurese (l) = g creatinina/24 h
P1 – P2
Urina de 2 horas:
A1 – A2 2.0
50
-----------x---------x------ x volume (ml) x 12 = g creatinina/24 h
P1 – P2 1000 100
Espécime n=10
CONTROLE DE QUALIDADE
GT Laboratório S.R.L. fabrica e comercializa reagentes para diagnóstico in vitro sob
Boas Práticas de Fabricação (Good Manufacturing Practices) certificadas de acordo
com O.M.S./W.H.O. Technical Report Series 908/2003, C.E.E. Res. 91/536 e A.N.M.A.T.
Disp. Nº 3623/1997, ISO 9001:2008 e ISO 13485:2003. Os termos e as condições da
qualidade são absolutos dentro das responsabilidades que correspondem a
GT Laboratório S.R.L.
Fabricado pela GT Laboratorio S.R.L.
Necochea 3274 – Rosário - Argentina
Uso profissional exclusivo. Autorizado pela A.N.M.A.T. PM 121-42.
Diretor técnico: Daniel Gazzola, Bioquímico
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E-mail: [email protected]
Site: www.gtlab.com.ar
Código de revisão: 82090000/14