MAST ASSURE ™ FEBRILE ANTIGENS

™
MAST ASSURE FEBRILE ANTIGENS
Descrição e princípio do teste
Suspensões de antigénios corados para testes Widal e Weil-Felix. Para a
identificação e detecção quantitativa de anticorpos específicos no soro
humano para fins epidemiológicos e diagnósticos, principalmente na
investigação de pirexia e de infecções entéricas com determinados
patogéneos de salmonelas, Rickettsiae e Brucellae. São adequados para
ambos os testes: lâminas rápidas e de aglutinação em tubo.
Conteúdo
AENAS PARA USO EM DIAGNÓSTICO IN VITRO.
O MAST ASSURE FEBRILE ANTIGENS™ são suspensões coradas de
antigénios (ao menos marcadas) de bactérias mortas, coradas para aumentar
as leituras dos testes de aglutinação. Os antigénios ‘O’ somáticos são corados
de azul e os antigénios ‘H’ flagelares são corados de vermelho e estão
disponíveis da seguinte maneira:
Código
P00002
P00004
P00006
P00008
P00010
P00011
P00012
P00014
P00016
P00018
P00020
P00022
P00024
P00026
P00030
P00032
Especificação
Salmonella typhi H
Salmonella H paratyphi A
Salmonella H paratyphi B
Salmonella H paratyphi C
Salmonella typhi O
Salmonella typhi Vi (unstained)
Salmonella O paratyphi A
Salmonella O paratyphi B
Salmonella O paratyphi C
Brucella abortus
Brucella melitensis
Proteus OX2
Proteus OX19
Proteus OXK
Positive Polyvalent Febrile Control
Negative Febrile Control
Conteúdo
5ml
5ml
5ml
5ml
5ml
5ml
5ml
5ml
5ml
5ml
5ml
5ml
5ml
5ml
1ml
1ml
Estabilidade e armazenamento
Armazene fechado a 2-8°C em posição vertical até á data de validade
mostrada na etiqueta da embalagem. Depois de aberto, o MAST ASSURE™
FEBRILE ANTIGENS deve ser armazenado a 2-8°C e pode ser usado até à
data de validade marcada na etiqueta. Os reagentes podem sensíveis à luz.
Não congele os reagentes.
Avisos e precauções
Apenas para uso em diagnóstico in vitro. Observe as precauções de perigo
biológico aprovadas e técnicas assépticas. Para ser usado apenas por pessoal
de laboratório adequadamente treinado e qualificado. Esterilize todos os
resíduos biologicamente perigosos antes de eliminá-los. Os equipamentos não
descartáveis têm que ser esterilizados após serem usados através de métodos
apropriados. Os salpicos e derrames de material potencialmente infeccioso
deve ser absorvido e eliminado da maneira acima descrita. O local do derrame
deve ser esterilizado com desinfectante ou 70% de álcool.
Não pipete com a boca. Os reagentes de controlo contêm soro de coelho. Os
produtos contêm azida de sódio (0.095% w/w) e Tiomerosal™ (0.0095% w/w)
como conservantes. Veja a ficha de dados de segurança do produto. Não inale
ou ingira aerossóis lave os salpicos com muita água.
Precauções analíticas:
Não modifique os procedimentos de teste. Não dilua ou modifique os
reagentes de maneira nenhuma. Permita que todas as amostras e reagentes
atinjam a temperatura ambiente (18- 30°C) antes de usá-los. Não misture
reagentes de diferentes lotes.
Materiais necessários mas não fornecidos
Amostras e equipamento microbiológico Standard tal como pequenos tubos de
plástico ou de vidro, pipetas, lâminas de reacção com fundo branco.
Agitadores e banhos a 37°C e 50°C.
Procedimento
A. Preparação das amostras
Use amostras de soro frescas obtidas por centrifugação do sangue coagulado.
As amostras de soro podem ser armazenadas a 2-8°C até 48 horas ou
congeladas para períodos de armazenamento mais longo. Não use espécimes
de plasma ou soro activados por calor, hemolisadas, lipémicas ou
contaminadas.
B. Procedimento de titulação rápida em lâmina
1. Usando uma pipeta, dispense 80l, 40l, 20l, 10l e 5l de soro não
diluído numa fila de círculos de 3cm de diâmetro numa lâmina de reacção.
2. Agite o frasco de reagente de antigénio muito bem e adicione uma gota da
suspensão de antigénio não diluído a cada aliquota de soro.
3. Misture bem usando um agitador e rode a lâmina.
4. Leia a aglutinação após um minuto.
C. Procedimento de aglutinação em tubo
Todos os resultados positivos da titulação rápida em lâmina devem ser
confirmados usando a seguinte técnica.
1. Etiquete 8 pequenos tubos de plástico de um suporte.
2. Usando uma pipeta, dispense 1.9 ml de 0.85% solução salina no primeiro
tubo, e 1.0 ml nos restantes sete.
3. Usando uma pipeta, dispense 0.1 ml do soro não diluído do paciente no
primeiro tubo.
4. Misture bem o conteúdo com a pipeta. Não crie bolhas de ar.
5. Dispense 1.0 ml do primeiro tubo no segundo tubo e misture bem.
6. Continue este método de duplicar as diluições até ao sétimo tubo e depois
descarte 1.0 ml do sétimo tubo. O oitavo tubo irá conter apenas solução
salina como controlo e por isso, não pode ter soro algum.
7. Agite bem o frasco de reagente de antigénio antes de o usar e adicione
depois uma gota da suspensão de antigénio apropriada a cada tubo e
misture bem.
8. Incube os tubos da seguinte maneira:
• antigénios Salmonella “O” e Proteus durante 4 horas a 50°C.
• antigénios Salmonella “H” durante 2 horas a 50°C.
• Antigénio Brucella durante 24 horas a 37°C.
• Salmonella typhi Vi durante 2 horas a 37°C.
Deixe todos os tubos no frigorífico durante a noite depois deixe que atinjam
a temperatura ambiente antes de ler os resultados.
NB: é muito importante que quando os tubos são colocados no banho de
água, o nível da água deve chegar a cerca de 2/3 acima do nível do
conteúdo dos tubos. Isto mantém as correntes de convecção dentro do
tubo e previne resultados falsos.
9. Analise os tubos após o tempo de incubação apropriado e verifique se há
aglutinação.
Interpretação dos resultados
Procedimento de titulação rápida em lâmina
Aglutinações vistas em quailquer um dos círculos dos cartões de reacção é
indicativo dos seguintes resultados num teste de procedimento de aglutinação
em tubos. Desta maneira o procedimento de titulação em lâmina dá uma
aproximação aos resultados esperados num procedimento de aglutinação em
tubo.
Volume
Resultados
80l
1:20
40l
1:40
20l
1:80
10l
1:160
5l
1:320
É importante que todas as aglutinações nas lâminas de teste sejam
conduzidas para permitirem que qualquer efeito “prozone” (onde as
concentrações mais altas do soro podem dar um resultado negativo mas as
diluições seguintes podem dar um resultado positivo) seja reconhecido e
ignorado.
Procedimento de aglutinação em tubo
Os tubos devem ser lidos após o tempo de incubação recomendado para
eliminar a possibilidade de resultados falsos. Um resultado negativo e o
controlo salino não devem apresentar nenhuma mudança em aspecto e devem
mostrar um “swirl” quando virados ao contrário. Não deve abanar os tubos. Um
teste positivo mostrará uma aglutinação flocular óbvia através do tubo. Os
últimos tubos que apresentem sinais de aglutinação devem ser considerados
como os títulos para esse teste.
Limitações de uso
Descobriu-se que muitos serotipos de Salmonella possuem antigénios
somáticos do mesmo tipo. Por isso, a aglutinação de qualquer antigénio de
Salmonella com o soro humano não deve ser prova de infecção por um
organismo particular, mas sim como uma infecção causada por um organismo
com uma estrutura antigénica similar. Os tubos devem ser lidos após o tempo
de incubação recomendado para eliminar a possibilidade de resultados falsos.
O último teste que apresente sinais de aglutinação deve ser tratado como o
titulo para esse teste. Para resultados negativos, todos os testes devem estar
livres de aglutinação. Muitas populações ou comunidades podem apresentar
níveis altos de anticorpos residuais, muitas vezes em excesso de 1/80 – 1/160.
Os pacientes também podem apresentar níveis altos de anticorpos residuais
de infecções prévias. Para que um teste tenha importância clínica deve ser
demonstrado um aumento no título e não apenas um titulo elevado num único
teste. Doenças crónicas do fígado também causam um aumento do titulo dos
anticorpos de salmonella. Devem-se evitar amostras altamente lipémicas,
hemolíticas ou contaminadas.
Características de Desempenho
A capacidade de desempenho geralmente aceite do teste Widal usando
antigénios febris é 70% de especificidade e de sensibilidade. Como os testes
serológicos usados no diagnóstico de infecções por Salmonella tem limitações
importantes, normalmente são preferidas culturas de espécimes apropriados.
Controlo de qualidade
Recomenda-se que o controlo de qualidade seja efectuado em intervalos
regulares com controlos febris positivos e negativos, para verificar que o teste
está a funcionar correctamente. Não use os reagentes se estes apresentarem
sinais de deterioração.
Referências
Bibliografia disponível a pedido.
IFU034 PM 02/09 V1
MAST é uma Marca registada