Teste rápido para a detecção de anticorpos contra Ehrlichia canis

Fassisi EhrCanis – Teste rápido para a detecção de anticorpos contra Ehrlichia canis
Instruções de uso
O Fassisi Ehrcanis é um teste rápido utilizado para a
detecção de anticorpos específicos contra a Ehrlichia canis
em amostras de sangue total, soro ou plasma de cães.
Ehrlichia canis:
A ehrlichiose monocítica canina (CME) é uma doença
transmitida por carrapato. O patógeno é a Ehrlichia canis
que é uma bactéria gram-negativa intracelular obrigatória
da família das Rikettsiaceae que é transmitida pelo
carrapato marrom Rhipicephalus sanguineus. A doença
ocorre no cão, especialmente no sul da Europa. Após um
período de incubação de 8 a 20 dias, o curso da doença é
dividido em três fases: a primeira, fase aguda na qual os
sintomas clínicos não são patognomônicos e com sintomas
inespecíficos leves como perturbação geral da saúde,
fadiga, febre, aumento de linfonodos, anorexia e dispnéia.
O patógeno infecta linfócitos e monócitos. A segunda, fase
subclínica que pode durar de alguns meses a alguns anos e
é caracterizado pela persistência do patógeno, com o
aumento da produção de anticorpos. Estes cães aparentam
ser clinicamente saudáveis. A terceira fase é uma CME
crônica caracterizada por sintomas complexos resultante
de diferentes manifestações nos órgãos pelo patógeno e a
persistente produção de anticorpos. Assim, as
conseqüências
podem
ser
glomerulopatias
por
imunocomplexos
mediados,
defeitos
ocultos
patognomônicos, artropatias, esplenomegalias, ou outros
sintomas neurológicos. Sintomas inespecíficos tais como
febre, anorexia e apatia também continuam a ter maior
domínio. Um teste sorológico para anticorpos contra
E.canis deve ser sempre interpretado em conjunto com o
atual sintoma clínico. A detecção de anticorpos é possível
depois de 7 dias de infecção, e indica um contato passado
com o patógeno. Contudo em alguns casos a soro
conversão pode ás vezes levar até 4 semanas. Mas mesmos
cães com a infecção parada numa fase inicial pode ainda
ter títulos baixos de anticorpos durante meses e serem
sorologicamente negativos. É aconselhado um exame
regular. Com o Fassisi EhrCanis Veterinários podem utilizálo como ferramenta precisa e rápida para a detecção da
infecção por E.canis em um estágio inicial para uma
prevenção e tratamento adequados.
- Armazenamento e expiração:
O Fassisi EhrCanis deve ser armazenado na temperatura
de 2 a 30°C.
A validade do kit é de 18 meses após a data de fabricação
impressa na embalagem do kit.
- O cassete teste:
A tira de teste está localizada por trás da tampa plástica
do cassete teste. O campo de amostra está localizado à
direita do cassete. O campo de reação está localizado no
centro do cassete teste. As regiões de teste (T) e controle
(C) estão localizadas no campo de reação. A rotulação das
linhas de teste e controle está acima do campo de reação.
- Metodologia:
O Fassisi EhrCanis é um teste rápido por reação de imuno
sanduíche que foi desenvolvido para o uso profissional por
Veterinários. A reação emprega anticorpos específicos para
a captura de anticorpos contra a Ehrlichia canis a partir da
amostra e assim visualizar o agente. O Fassisi EhrCanis é
uma reação imunológica altamente sensível e vem em um
cassete de teste prático, em que uma membrana está
incluída.
A tira de testes do Faasisi EhrCanis tem uma almofada de
amostra, uma almofada de conjugado, que contém
antígenos específicos da E.canis marcados com ouro, uma
membrana pré revestida em que a segunda captura de
antígenos específicos de E.canis foi imobilizada na região da
linha de teste e um anticorpo controle foi imobilizado na
linha de controle da região do controle e finalmente uma
almofada pavio que faz o fluído aplicado correr no cassete
teste.
Mediante a aplicação da amostra sobre os anticorpos da
tira teste pra E.canis reage com o antígeno marcado com
ouro na almofada do conjugado. O fluído migra pela tira
teste por capilaridade. Na linha da região teste os
anticorpos marcados com ouro contra a E.canis irão formar
complexos que capturados e imobilizados pelos reagentes
de modo que uma linha vermelha será formada. A presença
de uma linha vermelha na região do teste (T) indica
resultado positivo. Se na amostra não conter anticorpos
para E.canis não haverá a formação de uma linha vermelha
na área teste(T). Adicionalmente uma linha vermelha irá se
formar na região controle (C), independentemente da
presença ou não de anticorpos contra a E.canis na amostra.
A linha controle serve como controle interno e indica se o
fluído teste foi bem aplicado na tira teste e que o
preenchimento da membrana foi adequado.
- Se as amostras forem transportadas, elas devem ser
embaladas de acordo com as normas locais para o
transporte de agentes biológicos.
- Precauções:
- Procedimentos:
- Somente para uso veterinário.
- Somente para uso profissional.
- Cassete teste de uso único.
- Utilizar o cassete teste dentro de 10 minutos após ter
retirado da embalagem.
- Utilizar uma quantidade adequada de amostra.
- Evitar a reação cruzada, utilizando um tubo de amostra
para cada amostra.
- Não tocar no campo de reação.
- Utilizar somente tampão original Fassisi no kit.
- A amostra pode estar contaminada. Seja cuidadoso com
o descarte do material utilizado.
- Não utilizar os testes se a embalagem estiver violada.
- Considerar o resultado do teste inválido com leitura do
mesmo após 10 minutos de reação.
- Soro ou plasma:
- Separe o soro ou o plasma do sangue.
- Abra a embalagem e retire a pipeta.
- Pipetar a amostra de soro ou plasma.
- Dispensar uma gota no campo de amostra do cassete
teste e aguardar alguns segundos até a amostra percorrer
toda a tira.
- Após procedimento acima, abrir o tampão e dispensar
2 gotas do tampão no campo de amostra. Se após 1:30
minutos o líquido não percorrer toda a tira 1 gota adicional
terá que ser colocada.
- Realizar a leitura do teste dentro de 10 minutos após
ter iniciado a reação.
- Conteúdo do kit:
- 5 cassetes testes com bolsa de secagem.
- 5 tubos de amostras.
- 5 pipetas.
- 1 tampão com 2,5 mL de reagente.
- 1 Instrução de uso.
- Adicionalmente é necessário 1 cronômetro.
- Amostras:
O Fassisi EhrCanis foi desenvolvido para exames de
sangue total, soro ou plasma.
- Separar o soro ou o plasma do sangue o mais breve
possível para evitar hemólise.
- Sangue colhido com Heparina ou EDTA pode ser
utilizado como amostra de plasma.
- Utilizar amostras livres de lipêmia e hemólise.
- O teste com sangue total diminui a sensibilidade do
resultado do teste.
- O teste tem que ser realizado imediatamente após a
coleta do material.
- Não deixe a amostra em temperatura ambiente por
períodos prolongados.
- Amostras de soro ou plasma devem ser guardados em
temperatura de 2 a 8°C por no máximo 3 dias.
- Para longos períodos de armazenamento guardar o
material na temperatura abaixo de -20°C.
- Sangue total coletado por venopunção armazenar o
material na temperatura de 2 a 8°C, se o teste não for
realizado dentro de 2 dias após a coleta.
- Não congelar o sangue total.
- Deixar as amostras em temperatura ambiente antes da
realização dos testes.
- As amostras congeladas devem ser descongeladas e
homogeneizadas antes da realização dos testes.
- As amostras não devem ser congeladas e descongeladas
novamente.
- Sangue total:
- Pegue o sangue total.
- Abra a embalagem e retire a pipeta.
- Pipetar o sangue total.
- Dispensar 1 gota do sangue total no tubo de amostra.
- Dispensar 3 gotas do tampão no tubo de amostra.
- Fechar o tubo de amostra e homogeneizá-lo.
- Abrir o tubo de amostra e pipetar o diluído.
- Dispensar 2 gotas do diluído no campo de amostra do
cassete teste. (colocar primeiro uma gota no cassete teste e
esperar alguns segundos para o diluído ser absorvido e
após aplicar a segunda gota).
- Se a reação não correr pela tira teste após 2 minutos,
adicionar mais 1 gota do tampão e observar se a reação
completa a tira teste caso não, adicionar mais 1 gota do
tampão.
- Realizar a leitura do resultado após 10 minutos da
reação ter completado a tira teste.
- Resultados:
-
Positivo: o resultado é positivo quando na linha
controle (C) e na linha teste (T) aparecer uma linha
vermelha, na área do teste (T) a linha vermelha pode variar
em sua tonalidade, pois a sua formação dependerá da
concentração de anticorpos contra a E.canis presente na
amostra.
- Características:
- Especificidade: 95,24%
- Sensibilidade: 94,12%
- Bibliografia:
-
Negativo: o teste é negativo quando apenas na área
controle (C) ocorrer formação da linha vermelha, ficando a
área teste(T) inalterada, significando que não foram
detectados anticorpos contra a E.canis na amostra.
- Simbologia:
-
Inválido: o teste é considerado inválido quando não
ocorrer formação da linha vermelha na área controle (C),
significando que o teste está inválido, pois o teste não foi
realizado adequadamente ou o kit passou da data de
validade ou o cassete teste após aberto permaneceu por
um período longo na temperatura ambiente.
Considerar os resultados com leitura superior a 10
minutos após o início da reação inválidos.
Os resultados dos testes devem ser interpretados
juntamente com a anamnese e exame físico. Todos os
resultados obtidos com o uso do sangue total como
amostra que não se correlacionam com o quadro clínico
deve ser repetido com soro ou plasma. Todos os resultados
duvidosos devem ser repetidos após 4 semanas
aproximadamente.
O descarte de todo o material utilizado deve ser feito
cuidadosamente embalando-os em sacos plásticos
adequados e seguindo as normas locais de descarte de
resíduos biológicos.