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PURIFICAÇÃO POR CONGELAMENTO E DESCONGELAMENTO DE
COMPOSTOS COM AÇÃO ANTIMICROBIANA EXTRAÍDOS DE
LENTINULA EDODES (1)
Nathieli Bastos de Souza (2), Camila Ramão Contessa (3), Luciano Almeida (4), Ana
Paula Manera (5), Caroline Costa Moraes (6)
(1)
Trabalho executado com recursos do Edital PDA 2014, da Pró-Reitoria de Pesquisa.
Estudante, bolsista PDA; Universidade Federal do Pampa; Bagé; Rio Grande do Sul; [email protected]
(3)
Estudante, bolsista FAPERGS; Universidade Federal do Pampa; Bagé; Rio Grande do Sul;
(4)
Técnico em laboratório; Universidade Federal do Pampa; Bagé; Rio Grande do Sul;
(5)
Professora co-orientadora; Universidade Federal do Pampa; Bagé; Rio Grande do Sul;
(6)
Professora orientadora; Universidade Federal do Pampa; Bagé; Rio Grande do Sul;
(2)
RESUMO: A purificação vem se tornando essencial para o isolamento e concentração de bioativos, e está
sendo usada em extratos com compostos que apresentem atividade antimicrobiana. A partir dai objetivou-se
com essa pesquisa a extração e purificação de compostos bioativos presentes no extrato do cogumelo
comestível Lentinula edodes por congelamento e descongelamento. Para tanto, foi feita a extração do
agente antimicrobiano contido no fungo nas temperaturas de 60°C e ambiente, foram purificadas por
congelamento e descongelamento e então submetidos a análise antimicrobiana pela metodologia da norma
NCCLS(2003). Como resultados foram obtidos porcentagem de inibição dos extratos do cogumelo na
temperatura ambiente e a 60ºC, nas quais se verificou inibição de cerca de 5,5 e 2 % respectivamente.
Palavras-Chave: Shiitake, Purificação, Composto antimicrobiano.
INTRODUÇÃO
O método de purificação por congelamento e descongelamento, é feito através do rompimento das células
por força de grandes cristais de água formandos intracelularmente durante o congelamento, que podem
perfurar a célula e provocar seu total rompimento ou lesioná-las a ponto de formar poros permeáveis
(COLLA, HERNÀNDEZ, 2003).
A purificação de compostos presentes em fungos, se torna interessante pelo fato destes possuírem
em sua composição bioativos com atividades antimicrobiana, antioxidantes, etc. O cogumelo comestível
Lentinula edodes, conhecido comercialmente como Shiitake, é rico em lipídeos, carboidratos, vitaminas e
sais minerais. Alguns estudos já apresentam resultados satisfatórios no combate de micro-organismos, que
causam danos a saúde humana, pelo cogumelo (PIERO, 2003). Por estes motivos nota-se a importância de
mais estudos na área de purificação de biocompostos oriundos de cogumelos. O fungo Lentinula edodes
produz compostos com atividade antimicrobiana, como comprovado por BRAGA (2013), sendo que a partir
da purificação estes compostos têm seu potencial aumentado. Objetivou-se com esse estudo a inibição do
micro-organismo Staphylococcus aureus, a partir do extrato de Lentinula edodes purificado pelo método de
congelamento e descongelamento.
METODOLOGIA
O fungo utilizado para análise foi desenvolvido em placa de Petri com Agar dextrose batata a partir de
um repique do tamanho de 1 cm x 1 cm, após a inoculação do repique do micélio na placa, este foi
incubada a 25°C em estufa bacteriológica com circulação de ar. No momento seguinte, com o micélio do
fungo já desenvolvido radialmente na placa, foi feita a extração do agente antimicrobiano contido neste.
A extração do antimicrobiano foi feita com solvente contendo twenn p.s. 80, com auxílio de alça de
drigaski foi feita a raspagem do micélio no Agar, está solução foi levada a agitação de 100 rpm por 1 hora
em shaker na temperatura de 60°C e em mesa agitadora em temperatura ambiente (T °A). Após a
extração foi feita a filtração para retirada de partículas solidas provenientes do micélio raspado, com filtro de
0,45μm. A purificação por congelamento e descongelamento foi feita na sequência, as soluções foram
congeladas a -18°C e descongelamento a 4°C, esta consiste na desestabilidade de alguns componentes da
amostra, que sofrem agressão com a formação de cristais de gelo no interior das células, perdendo sua
atividade biológica, permitindo a purificação do composto de interesse.
Os extratos, a temperatura ambiente e 60°C purificados, foram submetidos à análise antimicrobiana
baseada na metodologia descrita pela norma NCCLS (2003), onde em microplacas foi inoculado 145 μL de
caldo Muller Hinton, 135 μL de extrato da amostra bruta ou purificada, nas duas temperaturas
separadamente, e 20 μL de microbiota contaminante, em cada poçinho. Todas as análises foram feitas em
Anais do VII Salão Internacional de Ensino, Pesquisa e Extensão – Universidade Federal do Pampa
triplicada, e as leituras de absorbância foram feitas em leitora de microplacas no comprimento de onda de
630 nm, realizadas após a inoculação do micro-organismo e após 16 horas de incubação em estufa
bacteriológica na temperatura de 35°C. Foi feito um branco, usado como controle, para comparação dos
valores de turbidez, para descobrir o potencial de inibição do extrato contra a microbiota.
RESULTADOS E DISCUSSÃO
A partir da Equação (1) foi feita a porcentagem de inibição do extrato do micélio do fungo Lentinula
edodes contra o desenvolvimento do micro-organismo Staphylococcus aureus nas duas temperaturas de
extração testadas.
(1)
Os resultados da porcentagem estão dispostos na Figura (1) mostrada abaixo, onde no eixo y esta
disposta a porcentagem de inibição do extrato do cogumelo, e no eixo x as amostras testadas (amostra
bruta e amostra purificada).
Figura 1: Porcentagem de inibição do extrato de Lentinula edodes, purificado por congelamento e
descongelamento.
A partir dos resultados encontrados pode-se observar que o processo de purificação por
congelamento e descongelamento, se mostrou eficiente para a concentração de compostos com ação
antimicrobiana na amostra do extrato do cogumelo, pois na amostra bruta não apresentou inibição, já na
amostra purificada o composto se destacou enquanto agente inibidor.
CONCLUSÕES
A partir dos resultados encontrados para a porcentagem de inibição do cogumelo Lentinula edodes
frente ao micro-organismo Staphylococcus aureus, observou-se a presença do agente antimicrobiano no
extrato purificado do cogumelo estudado.
Observou-se a eficiência do processo de purificação por congelamento e descongelamento, pois no
extrato bruto o cogumelo não apresentou ação antimicrobiana e após a purificação o composto com
atividade se mostrou ativo no extrato, inibindo o micro-organismo gram positivo.
REFERÊNCIAS
BRAGA, L. T. Obtenção e purificação de extratos antimicrobianos de Lentinula edodes (Shiitake). Trabalho
de Conclusão de Curso, Universidade Federal do Pampa, Bagé, 2013.
COLLA, L. M; HERNÁNDEZ, C. P; congelamento e descongelamento – sua influência sobre os alimentos;
Vetor, Rio Grande, 13: 53-66, Fundação Universidade Federal do Rio Grande, 2003.
NCCLS: Metodologia dos testes de sensibilidade a agentes antimicrobianos por diluição para bactéria de
crescimento aeróbico: Norma Aprovada – Sexta Edição; v. 23, nº. 2, 2003.
PIERO, R. M. D, Potencial dos cogumelos Lentinula edodes (SHIITAKE) e Agaricus blazei (COGUMELO
DO SOL) no controle de doenças em plantas de pepino, maracujá e tomate, e a purificação parcial de
compostos biologicamente ativos. Universidade de São Paulo. São Paulo, SP. 171 pag. São Paulo 2003.
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