METODOLOGIA Cinética UV – Imunoinibição. REAGENTES

BIBLIOGRAFIA CONSULTADA
1. Abbot B et al. Creatinine kinase.
Kaplan A et al. Clin Chem The C.V.
Mosby Co. St Louis.
Toronto. Princeton 1984: 1112-116.
2. Gerhardt W et al. Creatine kinase
B-Subunit activity in serum after
immunohinhibition of MSubunit activity.
Clin Chem 1979;(25/7): 1274-1280.
3. Young DS. Effects of drugs on Clinical
Lab. Tests, 4th ed AACC Press, 1995.
4. Young DS. Effects of disease on
Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC 2001.
5. Burtis A et al. Tietz Textbook of
Clinical Chemistry, 3rd ed AACC 1999.
6. Tietz N W et al. Clinical Guide to
Laboratory Tests, 3rd ed AACC 1995.
7. Mathieu M. et coll. Recommandation
pour la mesure de la concentration
catalytique de la créatinine kinase dans
la sérum humain. Ann. Biol. Clin.,40,
(1482), 87.
8. Doles: Dados de Arquivo.
CNPJ: 01.085.513/0001-05
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Palmares
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CKMB
M.S.: n° 10231810103
PRINCÍPIO
A enzima CK total é um dímero
formado pela união de 2 monômeros
ou subunidades da CK. A junção dos
dois monômeros CKM e CKB geram a
formação de 3 dímeros de CK: CKBB,
CKMM e CKMB.
A CKBB é encontrada no cérebro sendo,
praticamente, inexistente no sangue
periférico.
A CKMM é específica da musculatura
estriada do organismo, (músculos
periféricos e coração) predominando nos
músculos periféricos.
A CKMB é encontrada na musculatura
cardíaca.
O reagente Doles para CK-MB contém
um anticorpo anti-monômero CKM, que
bloqueia as frações MM de CKM e fração
M de CKMB. Resta livre o monômero
CK-B.
A atividade da CK-B é determinada pelas
seguintes reações:
Revisão:
TERMOS E CONDIÇÕES DE GARANTIA
DA QUALIDADE DO PRODUTO
As garantias do fabricante ao consumidor
seguem estritamente as relacionadas
na Lei no 8.078, de 11 de setembro de
1.990 - Código de Defesa do Consumidor.
Os reagentes que compõem este
sistema para diagnóstico são garantidos
na sua performance, reprodutibilidade
e qualidade até a data de vencimento.
Todos os produtos que apresentarem
problemas técnicos comprovados
serão substituídos, sem ônus para o
consumidor.
Doles Reagentes e Equipamentos para
Laboratórios Ltda.
4/4
SAC: (62) 3269 0000 (Grande Goiânia)
SAC: 0800 644 6433 (Demais localidades)
03 (03/2012)
FINALIDADE
Sistema para determinação de CKMB no
soro ou plasma.
Somente para uso diagnóstico in
vitro.
BIOQUÍMICA CLÍNICA
METODOLOGIA
Cinética UV – Imunoinibição.
REAGENTES
Reagente 1: Imidazol pH 6,7 125mmol/L,
D-Glicose 25mmol/L, N-Acetyl-LCysteine 25mmol/L, Acetato de Magnésio
12.5mmol/L, NADP 2.52mmol/L, EDTA
2.02mmol/L e Hexokinase >/=6800U/L.
Reag en te 2: A D P 1 5 . 2 m m o l / L ,
A M P 2 5 m m o l / L , d i -A d e n o s i n e - 5 pentaphosphate 103mmol/L, Glucose-6phosphate dehydrogenase >/= 8800U/L,
Creatine phosphate 250mmol/L.
APRESENTAÇÃO
CK-MB Ref. A
Reagente 1 Reagente 2 CK-MB Ref. B
Reagente 1 Reagente 2 NÚMERO DE TESTES
CK-MB Ref. A
Manual
Automação (*)
15 x 1,80mL
15 x 0,45mL
5 x 8mL
5 x 2mL
30 testes
150 testes
CK-MB Ref. B
Manual
50 testes
250 testes
1. Fosfocreatina + ADP + CK-B ⇒ Creatina Automação (*)
+ ATP
2. ATP + Glicose + HK ⇒ ADP + Glicose- (*) A quantidade de testes na
automação é variável de acordo com
6-Fosfato
3. Glicose-6-Fosfato + NADP + Glicose-6- o equipamento.
Fosfato Desidrogenase ⇒ 6-Fosfogluconato Protocolos de automação encontramse disponíveis no site Doles ou
+ NADPH + H
através do Serviço de Atendimento
ao Consumidor.
A velocidade de formação de NADPH é
determinada fotometricamente, sendo
EQUIPAMENTOS E MATERIAIS
diretamente proporcional à concentração NECESSÁRIOS NÃO FORNECIDOS
de CK-B na amostra ensaiada, até os • Fotômetro com leituras em 340nm,
limites de linearidade.
cubeta termostatizável (37ºC), com
Existindo em quantidade equimoleculares, 10mm de passagem de luz e banda
o valor CKB equivale a 50% de CKMB.
espectral de 8nm ou menos;
A atividade enzimática encontrada • Pipetas graduadas;
multiplicada por 2 representa a atividade • Pipeta semiautomática;
• Ponteiras descartáveis;
de CKMB.
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ARMAZENAMENTO E ESTABILIDADE
DOS REAGENTES
Reagente 1: armazenar à temperatura de
2-8°C. Estável até a data de vencimento
indicada no rótulo do frasco, obedecidas
as condições de armazenamento.
Reagente 2: armazenar à temperatura de
2-8°C. Estável até a data de vencimento
indicada no rótulo do frasco, obedecidas
as condições de armazenamento.
Reagente de Trabalho: armazenar
protegido da luz à temperatura de 2-8°C.
Estável por 2 semanas, obedecidas as
condições de armazenamento.
Realização do teste:
1.Transferir 1mL do reagente de trabalho
para um tubo de ensaio e deixá-lo por
alguns minutos à temperatura de 37ºC.
2.Adicionar 50mL da amostra ao reagente
de trabalho e homogeneizar com ligeira
agitação.
3.Transferir a solução para cubeta
termostatizada a 37ºC (por aspiração
em equipamentos dotados de cubeta de
fluxo), comprimento de onda de 340nm.
4.Esperar 180 segundos.
5.Fazer a leitura inicial (A inicial),
disparando simultaneamente o
cronômetro. Anotar o achado.
6.Repetir a leitura (A final) 300 segundos
CUIDADOS E PRECAUÇÕES COM O USO
após a primeira leitura.
DOS REAGENTES
7.Anotar o achado.
O r e a g e n t e s é s o m e n t e p a ra u s o
diagnóstico in vitro. Seu manuseio deve
CÁLCULO
ser cuidadoso, evitando-se contato com
pele e mucosas. Em caso de contaminação
CK-MB U/L = (A final - A inicial) x 1350
acidental, lavar a parte afetada em água
corrente. O descarte do material utilizado Exemplo:
= 0,262
deverá ser feito obedecendo-se os critérios Leitura inicial (A inicial) = 0,335
de biossegurança estabelecidos pelo Leitura final (A final)
laboratório, de acordo com as normas CK-MB U/L =(0,335 - 0,262) x 1350 = 98,55
locais, estaduais ou federais.
DETERMINAÇÃO DO FATOR
Observar a simbologia
constante nos rótulos
do produto:
Irritante
AMOSTRA
Soro livre de hemólise ou plasma (heparina).
A enzima permanece estável no soro por 7
dias, se mantida à temperatura de 2-8ºC
e protegida da luz.
Todas as amostras biológicas devem
ser consideradas como potencialmente
infectantes.
Fator =
1
1,05
x
6,22
1
x
0,05
x 1000 x 2 = 1350
5
6,22 = absorção molar de NADPH+ (um
mmol de NADPH+ em um mililitro de
solução, cubeta 10mm diâmetro interno,
340nm tem uma absorvância de 6,3).
1,05 = volume total da reação em mL
0,05 = volume de soro em mL
5
= fator de correção de D5 para D1
1000 = fator / transformação de mililitro
PROCEDIMENTO TÉCNICO
em litro.
Preparo do Reagente de Trabalho:
= fator de conversão de CKB em
Incorporar o reagente 2 ao frasco do 2
CKMB.
reagente 1.
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LINEARIDADE
A reação é linear até uma concentração de
500 U/L. Sendo a concentração de CK-MB
na amostra > 500 U/L diluir a amostra
com solução fisiológica e repetir o teste.
Multiplicar o valor encontrado pelo fator
de diluição.
LIMITAÇÕES DO SISTEMA
• Para se obter ótimo desempenho do
sistema, é necessário que o procedimento
técnico seja rigorosamente seguido
conforme instruções de uso. Alterações
no procedimento técnico podem levar a
resultados errôneos.
do CK-MB possuem relação direta com
a área infartada. Outras situações
que não o infarto o miocárdio, que
proporcionam o aumento da CK-MB,
dentre estes podemos citar: miocardites,
cardiomiopatias, cirurgias cardíacas.
CARACTERÍSTICAS DE DESEMPENHO
Foram realizados em uma população
com teor variável do analito. O método
foi comparado com um kit de marca
comercial de mesma metodologia.
Foram obtidos os seguintes resultados:
Coeficiente de correlação (r) = 0,99
E q u a ç ã o d e Re g r e s s ã o L i n e a r =
y=1,0183x + 0,308
CONTROLE DA QUALIDADE DO
Repetitividade
SISTEMA
Amostra 1
1.A limpeza e a secagem adequada do
material a ser utilizado são de fundamental Concentração (U/L)
25
importância para a estabilidade dos
reagentes e obtenção de resultados Coeficiente de variação (%) 9,8
corretos.
2.As pipetagens devem ser precisas.
Reprodutibilidade:
3.O uso de soro controle de referência deve
Amostra 1
ser uma prática rotineira do laboratório.
Recomenda-se utilizar um soro controle Concentração (U/L)
25
com valor na faixa de normalidade e outro Coeficiente de variação (%)
10,4
soro controle de valor elevado.
VALORES DE REFERÊNCIA
É recomendado que cada laboratório
estabeleça sua própria faixa de valores de
referência na população atendida.
Como orientação, sugerimos os seguintes
valores:
CK-MB (37ºC):0 -24U/L
SIGNIFICADO CLÍNICO
A determinação da isoenzima CK-MB é
um dos parâmetros de referência para
determinação da lesão miocárdica. O
aumento inicial ocorre entre 3 a 8 horas
após o início dos sintomas, com ápice
entre 12 a 24 horas e com retorno a
normalidade entre 48 e 72horas.
Os valores encontrados na determinação
SAC: (62) 3269 0000 (Grande Goiânia)
SAC: 0800 644 6433 (Demais localidades)
Amostra 2
74
2,6
Amostra 2
66
4,6
Especificidade: O método é específico
para determinação de CK-MB. A presença
de anti-corpo policlonal CK-M é suficiente
para inibir até 2000U/L de CK-MM.
Sensibilidade: O método possui ainda
capacidade de detecção situado no
intervalo entre o limite de quantificação
e o limite de linearidade: 1 a 500U/L.
Substâncias interferentes:
• Não utilizar amostras hemolisadas.
• Nenhuma interferência foi observada
em amostras com teor de glicose
de até 700mg/dL, Hemoglobina até
600mg/dL e Triglicérides até 700mg/dL.
• Ver limitações do sistema.
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