TRANSAMINASE OXALACÉTICA

TRANSAMINASE OXALACÉTICA
Instruções de Uso
Finalidade . Sistema para medida da atividade da Transaminase
Oxalacética (TGO) em amostra de sangue por método cinético de tempo
fixo e medição de ponto final.
[Somente para uso diagnóstico in vitro.]
Princípio . A transaminase oxalacética promove a transferência de
grupamentos amina de α-aminoácidos para α-cetoácidos.
TGO
L-Aspartato + α-cetoglutarato
Glutamato + Oxalacetato
O oxalacetato formado é medido através da formação de hidrazona, a
qual tem intensa cor em meio alcalino.
Características do sistema .
O sistema Transaminase
Oxalacética Labtest contém todos os reagentes necessários a uma
segura determinação, utilizando um processo em 4 etapas e permitindo
que a fotometria seja realizada em qualquer fotômetro que tenha filtros
com emissão entre 490 a 540 nm.
Os reagentes são rigorosamente padronizados e estabilizados visando à
manutenção de rígidas e ótimas condições para a ação enzimática.
O hidróxido de sódio é preparado e titulado em condições de rigoroso
controle, o que elimina a presença de carbonato e assegura uma ação
correta do reagente.
Metodologia . Reitman e Frankel.
Reagentes
1.
1 - TGO Substrato - Armazenar entre 2 - 8 ºC.
Contém tampão 67 mmol/L, pH 7,4; ácido a-cetoglutárico 2,0 mmol/L,
ácido L-aspártico 99 mmol/L e azida sódica 15,4 mmol/L.
2.
2 - Reagente de Cor - Armazenar entre 2 - 8 ºC.
Não congelar. Contém 2,4-dinitrofenilhidrazina 1,0 mmol/L e ácido
clorídrico 1,0 mol/L.
3.
3 - NaOH - Estoque - Armazenar entre 2 - 25 ºC.
Contém hidróxido de sódio 1,25 mol/L. Reagente corrosivo.
4.
- Padrão - Armazenar entre 2 - 8 ºC.
Contém piruvato de sódio 2 mmol/L. Após o manuseio sugere-se
armazenar bem vedado para evitar evaporação.
Os reagentes não abertos, quando armazenados nas condições
indicadas, são estáveis até a data de expiração impressa no rótulo.
Durante o manuseio, os reagentes estão sujeitos à contaminações de
natureza química e microbiana que podem provocar redução da
estabilidade.
01 Português - Ref.: 52
Ref.: 52
MS 10009010031
Precauções e cuidados especiais
Os cuidados habituais de segurança devem ser aplicados na
manipulação de reagentes.
O NaOH - Estoque contém hidróxido de sódio que é corrosivo e pode
produzir queimaduras.
O TGO Substrato contém azida sódica que é tóxica. Deve-se tomar
cuidado para evitar a ingestão e, no caso de contato com os olhos, devese lavar imediatamente com grande quantidade de água e procurar auxílio
médico. A azida pode formar compostos altamente explosivos com
tubulações de chumbo e cobre. Utilizar grandes volumes de água para
descartar o reagente.
Como ocorre com toda reação enzimática, a rigorosa observação do
tempo e da temperatura de incubação é de grande importância para a
qualidade dos resultados obtidos. A diferença de 1 minuto no tempo de
incubação desta dosagem introduz um erro de 3,3% nos resultados.
Material necessário e não fornecido
1. Banho-maria mantido à temperatura constante (37 ºC)
2. Fotômetro capaz de medir, com exatidão, a absorbância entre 490 e
540 nm.
3. Pipetas para medir amostras e reagentes.
4. Cronômetro.
Influências pré-analíticas .
Amostras hemolisadas produzem
interferência positiva devido à elevada concentração de TGO nas
hemácias.
O alcoolismo crônico aumenta a atividade da TGO de 18 a 100%.
Amostra
Deve ser criado um Procedimento Operacional Padrão (POP) que
estabeleça procedimentos adequados para colheita, preparação e
armazenamento da amostra. Enfatizamos que os erros devidos à amostra
podem ser muito maiores que os erros ocorridos durante o procedimento
analítico.
Usar soro ou plasma (EDTA, heparina) e líquor. A atividade enzimática é
estável 4 dias entre 2 - 8 ºC e 2 semanas a 10 ºC negativos.
Como nenhum teste conhecido pode assegurar que amostras de sangue
não transmitem infecções, todas elas devem ser consideradas como
potencialmente infectantes. Portanto, ao manuseá-las devem-se seguir
as normas estabelecidas para biossegurança.
Para descartar os reagentes e o material biológico sugerimos aplicar as
normas locais, estaduais ou federais de proteção ambiental.
Interferências
Valores de Bilirrubina até 5 mg/dL e Triglicérides até 170 mg/dL não
produzem interferências significativas.
TGO (Unidades /mL)
Amostras hemolisadas produzem interferência positiva devido à elevada
concentração de TGO nas hemácias.
Procedimento
Valores de Triglicérides entre 170 e 900 mg/dL produzem interferência
positiva que pode ser minimizada utilizando o Branco de Amostra.
Minimização da ação de interferentes
1
Zero
2
24
Tubo nº
3
4
61
114
Ver observação 3.
Tomar 1 tubo de ensaio e proceder como a seguir:
TGO Substrato (nº 1)
Branco de Amostra . Misturar 3,0 mL de NaCl 150 mmol/L (0,85%) com
0,05 mL da amostra. Medir a absorbância em 505 nm ou filtro verde
(490 a 540), acertando o zero com água destilada ou deionizada. Subtrair
a absorbância assim obtida da absorbância do teste e obter a atividade da
transaminase oxalacética utilizando a curva de calibração. Este sistema
de correção é aplicável apenas nos casos em que a amostra produz
interferência fotométrica.
Teste
0,25 mL
Incubar em banho-maria a 37 ºC durante 2 minutos. O nível da água no
banho deve ser superior ao nível dos reagentes nos tubos de ensaio.
Amostra
0,05 mL
Misturar e incubar em banho-maria a 37 ºC exatamente 60 minutos.
Reagente de Cor (nº 2)
Preparo do reagente
5
190
0,25 mL
Misturar e deixar a temperatura ambiente 20 minutos.
Ver observações 1 e 2.
NaOH de Uso . Transferir quantitativamente o conteúdo do frasco nº 3
(160 mL) para um balão volumétrico ou proveta, completar para 500 mL
com água destilada ou deionizada livre de CO2 e homogeneizar. Estável 12
meses em recipiente de plástico entre 15 - 25 ºC.
NaOH de Uso
2,5 mL
Misturar e esperar 5 minutos. Determinar as absorbâncias ou T% em
505 nm ou filtro verde (490 a 540), acertando o zero com água destilada
ou deionizada. A cor é estável 60 minutos.
A água utilizada deve ter resistividade ≥1 megaohm ou condutividade
≤1 microsiemens e concentração de silicatos < 0,1 mg/L.
Obter o valor de TGO usando a curva de calibração (ver Desempenho do
Sistema).
Curva de calibração . Como o sistema de medida Reitman-Frankel
O procedimento sugerido para a medição é adequado para fotômetros
cujo volume mínimo de solução para leitura é igual ou menor que 3,0 mL.
Deve ser feita uma verificação da necessidade de ajuste do volume para o
fotômetro utilizado. Os volumes de amostra e reagente podem ser
modificados proporcionalmente sem prejuízo para o desempenho do
teste e o procedimento de cálculo se mantém inalterado. Em caso de
redução dos volumes é fundamental que se observe o volume mínimo
necessário para a leitura fotométrica. Volumes da amostra menores que
0,01 mL são críticos em aplicações manuais e devem ser usados com
cautela porque aumentam a imprecisão da medição.
(Unidades/mL) não segue a lei de Beer, é impossível utilizar o método do
fator para cálculo, sendo necessária a preparação de curva de calibração.
Tomar 5 tubos de ensaio e proceder como a seguir:
Padrão (nº 4)
TGO Substrato (nº 1)
Água destilada ou deionizada
Reagente de Cor (nº 2)
1
---0,5
0,1
0,5
Tubo nº (mL)
3
4
2
0,05 0,1 0,15
0,45 0,4 0,35
0,1
0,1
0,1
0,5
0,5
0,5
5
0,2
0,3
0,1
0,5
Misturar e deixar a temperatura ambiente durante 20 minutos.
NaOH de Uso
5,0
5,0
5,0
5,0
5,0
Misturar e deixar a temperatura ambiente durante 5 minutos. Determinar
as absorbâncias ou T% em 505 nm ou filtro verde (490 a 540), acertando
o zero com água destilada ou deionizada. A cor é estável por 60 minutos.
Traçado da curva de calibração . Traçar a curva de calibração
correlacionando as leituras obtidas com os valores em Unidades/mL
expressos na tabela abaixo, utilizando papel linear (para absorbâncias) ou
monolog (para T%).
02 Português - Ref.: 52
Desempenho do sistema . Quando for obtido um valor igual ou
maior que 190 Unidades/mL, diluir a amostra com NaCl 150 mmol/L
(0,85%), realizar nova medição e multiplicar o resultado obtido pelo fator
de diluição. Diluir a amostra de tal modo que o valor encontrado se situe
entre 50 e 150 Unidades/mL. Sugerimos a verificação do desempenho do
sistema no mínimo semestralmente, utilizando amostras com valores até
190 Unidades/mL.
Controle interno da qualidade . O laboratório deve manter um
programa de controle interno da qualidade que defina claramente os
regulamentos aplicáveis, objetivos, procedimentos, critérios para
especificações da qualidade e limites de tolerância, ações corretivas e
registro das atividades. Materiais de controle devem ser utilizados para
avaliar a imprecisão e desvios da calibração. Sugere-se que as
especificações para o coeficiente de variação e o erro total sejam
8,9
baseadas nos componentes da variação biológica (VB) .
UI = Unidades/mL x 0,482
A transaminase oxalacética quase sempre está elevada após o infarto
agudo do miocárdio, fato incomum para a pirúvica. A transaminase
oxalacética começa a elevar-se 6 a 12 horas após o infarto para alcançar
o pico máximo entre 24 a 48 horas, normalizando-se pelo 5º ou 6º dia.
Deve-se ressaltar que a sensibilidade e especificidade da dosagem de
AST no diagnóstico do infarto agudo do miocárdio são baixas, tornando a
determinação desta enzima a menos indicada para este diagnóstico.
Características do desempenho10
A uremia encontra-se associada à queda da AST.
Exatidão . Em duas amostras com concentrações de transaminase
oxalacética iguais a 22 e 129 Unidades/mL foram adicionadas
quantidades diferentes da enzima obtendo-se recuperações entre 104 e
108%. O erro sistemático proporcional médio obtido em um valor de 60
Unidades/mL foi igual a 3,6 Unidades/mL ou 6,0%.
Elevações significativas da atividade da AST no líquor têm sido
observadas em pacientes com acidentes cerebrovasculares. Se o nível
sérico da enzima encontra-se também elevado, trata-se provavelmente
de dano maciço ao parênquima cerebral. Neoplasias envolvendo o
cérebro e a medula espinhal são acompanhadas de vários graus de
elevação na atividade da AST no líquor.
Intervalo de referência . Estes valores devem ser usados apenas
como orientação. Recomenda-se que cada laboratório estabeleça, na
população atendida, sua própria faixa de valores de referência.
Soro . 4 a 36 Unidades/mL
Especificidade . O método proposto foi comparado com um método
similar utilizando 80 amostras com valores situados entre 11 e 174
Unidades/mL. A comparação resultou na equação da regressão: y =
0,895x - 6,818 e um coeficiente de correlação (r) igual a 0,99. O erro
sistemático total (constante e proporcional) verificado no nível de decisão
(60 Unidades/mL) foi igual a 13 Unidades/mL ou 22%. Como as amostras
foram selecionadas aleatoriamente em pacientes de ambulatório e
pacientes hospitalizados, pode-se inferir que o método tem uma
especificidade metodológica adequada.
Nos indivíduos com meningite bacteriana observam-se, usualmente,
valores dentro da faixa de referência.
Várias drogas comumente usadas encontram-se relacionadas ao
aumento da AST: isoniazida, fenotiazinas, eritromicina, progesterona,
esteróides, opiáceos, indometacina, halotano e metildopa.
Observações
1. A limpeza e secagem adequadas do material utilizado são fatores
Repetitividade - Imprecisão intra-ensaio
Amostra 1
Amostra 2
N
20
20
Média
19
61
DP
1,53
2,66
CV (%)
7,9
4,4
Reprodutibilidade - Imprecisão total
Amostra 1
Amostra 2
N
20
20
Média
20
59
DP
2,86
3,85
CV (%)
14,7
6,53
Sensibilidade metodológica . Uma amostra protéica não
contendo transaminase oxalacética foi utilizada para calcular o limite de
detecção do ensaio tendo sido encontrado um valor igual a
5,0 Unidades/mL, equivalente à média de 20 ensaios mais dois desvios
padrão.
Efeitos da diluição da matriz . Duas amostras com valores
iguais a 149 e 165 Unidades/mL foram utilizadas para avaliar a resposta
do sistema nas diluições da matriz com NaCl 150 mmol/L (0,85%).
Usando fatores de diluição que variaram de 2 a 8 foram encontradas
recuperações entre 88 e 100%.
Significado clínico . Elevações das transaminases ocorrem na
hepatite (viral e tóxica), na mononucleose, cirrose, colestase, carcinoma
hepático primário ou metatástico, pancreatite, traumatismo extenso e no
choque prolongado. Nas hepatopatias agudas, geralmente, o valor da
transaminase pirúvica (ALT) excede o da oxalacética (AST).
03 Português - Ref.: 52
fundamentais para a estabilidade dos reagentes e obtenção de resultados
corretos.
2. O laboratório clínico tem como objetivo fornecer resultados exatos e
precisos. A utilização de água de qualidade inadequada é uma causa
potencial de erros analíticos. A água deionizada ou destilada utilizada no
laboratório deve ter a qualidade adequada a cada aplicação. Assim, para
preparar reagentes, usar nas medições e para uso no enxágüe final da
vidraria, deve ter resistividade ≥1 megaohm.cm ou condutividade
≤1 microsiemens/cm e concentração de silicatos <0,1 mg/L. Quando a
coluna deionizadora está com sua capacidade saturada ocorre produção
de água alcalina com liberação de vários íons, silicatos e substâncias
com grande poder de oxidação ou redução que deterioram os reagentes
em poucos dias ou mesmo horas, alterando os resultados de modo
imprevisível. Assim, é fundamental estabelecer um programa de controle
da qualidade da água.
3. Para uma revisão das fontes medicamentosas de interferência nos
resultados e na metodologia, sugere-se consultar Young, DS. Effects of
a
Drugs on Clinical Laboratory Tests, 3 edição, Washington: AACC Press,
1990.
Referências
1. Karmen A. J Clin Invest 1955;34:131.
2. Reitman S, Frankel S. Am J Clin Path 1957;28:56.
3. Tietz NW. Fundamentals of Clinical Chemistry, W.B. Saunders Co,
1970.
4. Tonks DB. Quality Control in Clinical Laboratories, Warner-Chilcott
Laboratories, Diagnostic Reagents Division, Scarborough, Canada,
1972.
Informações ao consumidor
5. Varley H. Practical Clinical Biochemistry, Willian Heinemann Medical
Book Ltd. 1967.
A Labtest Diagnóstica garante o desempenho deste produto dentro das
especificações até a data de expiração indicada nos rótulos, desde que os
cuidados de utilização e armazenamento indicados nos rótulos e nestas
instruções sejam seguidos corretamente.
6. Wroblewski F, Cabaud P. Am J Clin Path 1957;27:235.
[Termos e Condições de Garantia]
7. Westgard JO, Barry PL, Hunt MR, Growth T.1981;27:493-501.
8. Sociedad Española de Bioquímica Clínica y Patología Molecular,
B a s e d e D a t o s d e Va r i a c i ó n B i o l ó g i c a . D i s p o n í v e l
em:<http://www.seqc.es/ar ticle/ar ticleview/330/1/170>
(acesso em 04/2006).
Labtest Diagnóstica S.A.
9. Basques JC. Especificações da Qualidade Analítica. Labtest
Diagnóstica 2005.
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10.Labtest: Dados de arquivo.
Apresentação
Produto
Copyright by Labtest Diagnóstica S.A.
Reprodução sob prévia autorização
Revisão: Março, 2009
Ref.: 050811
Referência
Conteúdo
1
Transaminase
Oxalacética
2
52-200
3
1 X 50 mL
1 X 50 mL
1 X 160 mL
1 X 4 mL
Símbolos utilizados com produtos diagnósticos in vitro
Símbolos usados con productos diagnósticos in vitro . Symbols used with ivd devices
Conteúdo suficiente para < n > testes
Contenido suficiente para < n > tests
Contains sufficient for < n > tests
Consultar instruções de uso
Consultar instrucciones de uso
Consult instructions for use
Controle
Control
Control
Tóxico
Tóxico
Poison
Data limite de utilização (aaaa-mm-dd ou mm/aaaa)
Estable hasta (aaaa-mm-dd o mm/aaaa)
Use by (yyyy-mm-dd or mm/yyyy)
Número do catálogo
Número de catálogo
Catalog Number
Controle negativo
Control negativo
Negative control
Reagente
Reactivo
Reagent
Controle positivo
Control positivo
Positive control
Fabricado por
Elaborado por
Manufactured by
Número do lote
Denominación de lote
Batch code
Material Calibrador
Material Calibrador
Calibrator Material
Adições ou alterações significativas
Cambios o suplementos significativos
Significant additions or changes
Material Calibrador
Material Calibrador
Calibrator Material
Produto diagnóstico in vitro
Dispositivo de diagnóstico in vitro
In vitro diagnostic device
Controle
Control
Control
Limite de temperatura (conservar a)
Temperatura limite (conservar a)
Temperature limitation (store at)
Liofilizado
Liofilizado
Lyophilized
Risco biológico
Riesgo biológico
Biological risk
Representante Autorizado na Comunidade Europeia
Representante autorizado en la Comunidad Europea
Authorized Representative in the European Community
Corrosivo
Corrosivo
Corrosive
Marca CE
Marcado CE
CE Mark
Ref.: 170309
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